1990 年度実績報告書

哺乳類中枢神経系の形態形成に関わる遺伝子の機能解析

研究課題

研究課題/領域番号	02044098
研究機関	大阪大学
研究代表者	御子柴克彦大阪大学, 蛋白質研究所, 教授 (30051840)
研究分担者	池中一裕大阪大学, 蛋白質研究所, 助教授 (00144527) GUENET Jeanーパスツール研究所(フランス国), 教授
キーワード	InsP_3レセプタ- / 染色体マッピング / 小脳プルキン工細胞 / カルシウムチャネル / 小胞体 / 中枢神経系 / 発生と分化 / in situ ハイブリダイゼ-ション
研究概要	本研究成果はフランス・パスツ-ル研究所ジャンルイ・ゲネ教授より導入した小脳ミュ-タントに関するものとミエリン形成障害ミュ-タントのニつに分けられる.プルキン工細胞の発達異常を示す小脳ミュ-タント(スタゲラ-)で欠損していたイノシト-ル3リン酸(IP3)はプルキン工細胞欠損マウスでも欠損しており、小脳プルキンエ細胞に特異的ともいえる程豊富に存在していた.IP3レセプタ-が機能的な蛋白質であるか否かをβアクチンプロモ-タ-の下流にcDNAを連結してLーフィブロブラストヘトランスフェリトさせ強制的にIP3レセプタ-を発現させて解析した.その結果IP3レセプタ-はホモテトラマ-構造をつくり、しかもそれ自身でカルシウムチャネルを形成することが明らかとなった。更にIP3との結合能力も増加した。IP3レセプタ-に対するモノクロ-ナル抗体を用いて免疫組識化学的手法で細胞内の滑面小胞体に特異的に局在し、しかもN末端、C末端ともに細胞質側に突出していることを証明した。ゲネ教授と共同で染色体マッピング法により、IP3レセプタ-遺伝子の染色体上の位置をマップした。一方ミエリン形成障害mldミュ-タントの分子遺伝学的解析によりミエリン塩基性蛋白賀遺伝子の重複変異と逆位がおきた重複変異であることを明らかにした。しかも逆位変異に対応してアンチセンセRNAが産生され、下流にある正常遺伝子の発現を抑制することを明らかにした。特にその証拠としてRNAーRNAデュ-プレックスの検出に成功した。ミェリン塩港性蛋白質遺伝子のこの様な組み換えは、免疫ブロブリンクラススイッチ領城の配列を含んだ断片の挿入によることを示した。

研究成果

(8件)

すべてその他

すべて文献書誌 (8件)

[文献書誌] Teiichi Furuichi: "primary structure and fuctional expression of the inositol 1,4,5ーtrisphosphateーbinding" Nature. 342. 32-38 (1989)
[文献書誌] Nobuaki Maede: "A cerebellar Purkinje cell marker P400 protein is an inositol 1,4,5ーtrisphosphate(InsP3)receptor prorein.Purification and chacracterization of InsP3 receptor complex." The EMBO Journal. 9. 61-67 (1990)
[文献書誌] Atsushi Miyawaki: "Expressed cerebellarーtype inostitol 1,4,5一trisphosーphate receptor.P400,has calcium release activity in a fibroblast L Cell line" Neuron. 5. 11-18 (1990)
[文献書誌] Teiichi Furuichi: "Distribution of inositol 1.4,5ーtrisphospate receptor mRNA in mouse tissues" FEBS Letters. 267. 85-88 (1990)
[文献書誌] Hideyuki Okano: "The myelin basic protein gene and the function of antisense RNA in its repression in myelin deficient mutant mouse" J.Neurochem. in press.
[文献書誌] Nobuaki Maeda: "Structural and functional characterization of inositol 1,4,5ーtrisphospate receptor channel from mouse cerebellum." J.Biological Chemistry. 266. 1109-1116 (1991)
[文献書誌] Katsuhiko Mikoshiba: "Structure and function of myelin protein genes. in“Annual Review of Neuroscience"" Annual reviews Inc., (1991)
[文献書誌] 御子柴克彦: "分子神経生物学" 丸善, 396- (1989)

1990 年度 実績報告書

哺乳類中枢神経系の形態形成に関わる遺伝子の機能解析

研究代表者

御子柴 克彦 大阪大学, 蛋白質研究所, 教授 (30051840)

研究成果

[文献書誌] Teiichi Furuichi: "primary structure and fuctional expression of the inositol 1,4,5ーtrisphosphateーbinding" Nature. 342. 32-38 (1989)

[文献書誌] Nobuaki Maede: "A cerebellar Purkinje cell marker P400 protein is an inositol 1,4,5ーtrisphosphate(InsP3)receptor prorein.Purification and chacracterization of InsP3 receptor complex." The EMBO Journal. 9. 61-67 (1990)

[文献書誌] Atsushi Miyawaki: "Expressed cerebellarーtype inostitol 1,4,5一trisphosーphate receptor.P400,has calcium release activity in a fibroblast L Cell line" Neuron. 5. 11-18 (1990)

[文献書誌] Teiichi Furuichi: "Distribution of inositol 1.4,5ーtrisphospate receptor mRNA in mouse tissues" FEBS Letters. 267. 85-88 (1990)

[文献書誌] Hideyuki Okano: "The myelin basic protein gene and the function of antisense RNA in its repression in myelin deficient mutant mouse" J.Neurochem. in press.

[文献書誌] Nobuaki Maeda: "Structural and functional characterization of inositol 1,4,5ーtrisphospate receptor channel from mouse cerebellum." J.Biological Chemistry. 266. 1109-1116 (1991)

[文献書誌] Katsuhiko Mikoshiba: "Structure and function of myelin protein genes. in“Annual Review of Neuroscience"" Annual reviews Inc., (1991)

[文献書誌] 御子柴 克彦: "分子神経生物学" 丸善, 396- (1989)

1990 年度実績報告書

御子柴克彦大阪大学, 蛋白質研究所, 教授 (30051840)

[文献書誌] 御子柴克彦: "分子神経生物学" 丸善, 396- (1989)