Srcファミリ-遺伝子fynのリンホ-マ並びに正常リンパ球における発現と機能

1990 年度 実績報告書

• 研究課題/領域番号: 02152030
• 研究機関: 東京大学
• 研究代表者: 片桐 拓也 東京大学, 医科学研究所, 助手 (70126100)
• 研究分担者: 須田 容子 理化学研究所, 研究員 (90201582) ; 仙波 憲太郎 東京大学, 医科学研究所, 助手 (70206663) ; 狩野 恭一 東京大学, 医科学研究所, 教授 (80152825)
• キーワード: Srcファミリ- / fyn / チロシン燐酸化酵素 / lpr / Tリンパ球 / T細胞抗原レセプタ- / 遺伝子導入

研究概要

srcファミリ-遺伝子fynの発現制御機構と、その産物p59^<fyn>チロシンキナ-ゼ(fyn)の生理的機能を解析して以下の知見を得た。
(1)発現:lprマウスで腫大リンパ節を構成する異常Tリンパ球においては、正常Tリンパ球に比べて約15倍のfyn mRNAの増大が認められるが、nuclear run on assayとactinomycinDを用いたfyn mRNA代謝速度の検定結果から、Iprリンパ球ではfyn nRNAのstabilityが増大していることが判明した。一方、活性化正常Tリンパ球に認められる一過性誘導発現では、核における転写量が増大していた。更に現在、前年度見だした前駆Bリンパ球におけるfynの高レベル発現がいずれの機序によるか検討している。
(2)機能:免疫沈降法とin vitro kinase assayとを組み合わせることによって、FynがTリンパ球抗原レセプタ-(TcR)と会合していることを見出した。このことはTcRと共にdown modulationされることからも示唆され、またFynの5乃至10%がTcRに会合していた。TcRへの会合量はlprTリンパ球では正常の2.5倍であり、リンパ腺腫脹の形成との関連が示唆された。このlprTリンパ球においては、活性化Tリンパ球と同様にTcRのシグナル伝達分子CD3ζ鎖が構成的にチロシン燐酸化されているが、CD3ζ遺伝子とfynとのcoーtransfectionの系を用いて、CD3ζがFynの基質になり得ることが示された。更にlprTリンパ球でGAP(GTPaseーactivating protein)のチロシン燐酸化も判明し、Fynを介した伝達系の一端が明らかとなった。TcRに会合するFynの機能を知るため、現在更に、作成した種々の活性型及び不活性型fynを導入発現させた抗原特異的T細胞ハイブリド-マの反応性を解析している。

研究成果

• [文献書誌] Matsuzawa,A.,Moriyama,T.,Kimura,M.,Ikeda,H.,and <Katagiri,T.>___ー: "A new allcle of the lpr locus,lpr^<cg>,that complements the gldgone in induction of lymphadenopathy in the mouse." J.Exp.Med.171. 519-531 (1990)
• [文献書誌] Katagiri,K.,<Katagiri,T.,>___ー Yamamoto,T.,and Yoshida,T.: "Expression of src family genes during monocytic differentiation of HL60 cells." J.Immunol.(1991)
• [文献書誌] Semba,K.,Kawai,S.,Matsuzawa,Y.,Yamanashi,Y.,Nishizawa,M.,and Toyoshima,K.: "Transformation of chicken embryo fibroblast cells by avian retroviruses containing the human fyn gene and its mutated genes." Mol.Cell.Biol.10. 3095-3104 (1990)
• [文献書誌] Takahashi,T.,Semba,K.,Yamamoto,T.,and <Katagir,T.>___ー: "Constitutive and inductive expression of protein ーtylosine kinase p59^<fyn> in T lymphocytes."
• [文献書誌] Takahashi,T.,Takemori,T.,Yamanashi,Y.,Yamamoto,T.,and <Katagiri,T.>___ー: "Expression of p59^<fyn> tyrosineーkinase in B cell ontogeny."
• [文献書誌] <Katagiri,T.>___ー,Kurokawa,A.,Yamanashi,Y.,Semba,K.,and Yamamoto,T.: "Enhanced association of p59^<fyn> tyrosineーkinase with Tーcell antigen reccptor in lpr CD4^ー CD8^ー T cells."
• [文献書誌] <片桐 拓也>___ー,<狩野 恭一>___ー: "最新免疫学 自己免疫マウスにみられるリンパ球の異常" 同文書院, 677-699 (1990)
• [文献書誌] <Semba,K.>___ー and Toyeshima,K.: "Genes and Cancer, Structure and function of srcーfamily kinases" John Wiley and Sons,England, T73-T83 (1990)