1990 年度実績報告書

培養中枢神経細胞における神経成長因子受容体の発現に関する分子生物学的研究

研究課題

研究課題/領域番号	02240208
研究機関	大阪大学
研究代表者	畠中寛大阪大学, たんぱく質研究所, 教授 (60208519)
研究分担者	池内俊彦大阪大学, 蛋白質研究所, 助手 (20093362)
キーワード	神経成長因子 / 神経栄養因子 / 神経成長因子受容体 / 神経細胞分化 / PC12細胞 / 前脳基底野神経細胞 / RNAブロット
研究概要	神経成長因子(NGF)作用の分子機構を明らかにする目的で、まず第一段階として、NGFレセプタ-の発現調節を解析し、その発現量を変動させる要因を検索した。モデルニュ-ロンであるラット副腎髄質クロマフィン細胞腫由来のPC12h細胞を用いて、NGFレセプタ-のmRNAをRNAブロット法で、また蛋白質自体をモノクロ-ナル抗体を用いたELISA法を解析した。PC12h細胞をコラ-ゲンコ-トしたディッシュ上に培養し、NGFを添加(最終濃度50ng/ml)すると、2〜4日で神経繊維を伸長し始め、PC12h細胞はニュ-ロン様に分化し始める。この過程でNGFレセプタ-の発現量の変動をまず解析した。PC12h細胞は、NGFの添加前も、既にレセプタ-を発現している。我々の解析によれば、NGFレセプタ-の発現はNGF添加による分化誘導の影響を受けず、変動しないことが分かった。むしろ、PC12h細胞の細胞密度を上げるとNGFレセプタ-の発現量が顕著に増加した。この結果は、細胞間の接着がNGFレセプタ-の発現を促進している可能性を示している。一方、我々の研究室で新たに分離したPC12h細胞の亜株でNGFに対する応答の早いPC12hーR細胞では、NGFレセプタ-の発現が高まっていることを見いだしている。PC12h細胞では、NGFレセプタ-の発現はNGF添加による分化誘導の影響を受けず、むしろ細胞密度に依存することが分かった。細胞密度を上げると、NGF添加の有無に関わらず、NGFレセプタ-の発現量が増加するので細胞間接着がNGFレセプタ-の発現を促進している可能性がある。PC12hーR細胞では、NGFレセプタ-の発現量が高くこのことがNGFに対する応答の早さの原因となっていると考えられる。今後、初代培養中枢ニュ-ロンでも解析を進める予定である。

研究成果

(7件)

すべてその他

すべて文献書誌 (7件)

[文献書誌] H.Hatanaka: "Nerveーgrowthーfactorーdependent and cellーdensityーindependent survival of septal cholinergic neurons in culture from postnatal rats." <Neurosci.Res.>___ー. 8,. 69-82 (1990)
[文献書誌] N.Takei: "Monitoring of acetylcholine released from postnatal rat basal forebrain cholinergic neurons cultured on membrane filter by cell bed perfusion system and HPLCーECD." <Exp.Neurol.>___ー. 108,. 229-231 (1990)
[文献書誌] K.Ikenaka: "Nerve growth factor rapidly induced expression of the 68 KDa neurofilament gene by posttranscriptional modulation in PC12hーR cells." <J.Biol.Chem.>___ー. 265,. 19782-19785 (1990)
[文献書誌] Y.Kushima: "High oxygen atmosphere for neuronal cell culture with nerve growth factor.I.Primary culture of basal forebrain cholinergic neurons from fetal and postnatal rats." <Brain Res.>___ー. 536,. 16-22 (1990)
[文献書誌] Y.Enokido: "High oxygen atmosphere for neuronal cell culture with nerve growth factor.II.Survival and growth of clonal rat pheochromocytoma PC12h cells." <Brain Res.>___ー. 536,. 23-29 (1990)
[文献書誌] T.Hama: "Interleukinー6 improves the survival of mesencephalic catecholaminergic and septal cholinergic neurons from postntal,twoーweekーold rats in cultures." <Neurosci.>___ー. 40,. 445-452 (1990)
[文献書誌] 小林春雄: "神経情報生物学入門" オ-ム社、東京, 243 (1990)

1990 年度 実績報告書

培養中枢神経細胞における神経成長因子受容体の発現に関する分子生物学的研究

研究代表者

畠中 寛 大阪大学, たんぱく質研究所, 教授 (60208519)

研究成果

[文献書誌] H.Hatanaka: "Nerveーgrowthーfactorーdependent and cellーdensityーindependent survival of septal cholinergic neurons in culture from postnatal rats." <Neurosci.Res.>___ー. 8,. 69-82 (1990)

[文献書誌] N.Takei: "Monitoring of acetylcholine released from postnatal rat basal forebrain cholinergic neurons cultured on membrane filter by cell bed perfusion system and HPLCーECD." <Exp.Neurol.>___ー. 108,. 229-231 (1990)

[文献書誌] K.Ikenaka: "Nerve growth factor rapidly induced expression of the 68 KDa neurofilament gene by posttranscriptional modulation in PC12hーR cells." <J.Biol.Chem.>___ー. 265,. 19782-19785 (1990)

[文献書誌] Y.Kushima: "High oxygen atmosphere for neuronal cell culture with nerve growth factor.I.Primary culture of basal forebrain cholinergic neurons from fetal and postnatal rats." <Brain Res.>___ー. 536,. 16-22 (1990)

[文献書誌] Y.Enokido: "High oxygen atmosphere for neuronal cell culture with nerve growth factor.II.Survival and growth of clonal rat pheochromocytoma PC12h cells." <Brain Res.>___ー. 536,. 23-29 (1990)

[文献書誌] T.Hama: "Interleukinー6 improves the survival of mesencephalic catecholaminergic and septal cholinergic neurons from postntal,twoーweekーold rats in cultures." <Neurosci.>___ー. 40,. 445-452 (1990)

[文献書誌] 小林 春雄: "神経情報生物学入門" オ-ム社、東京, 243 (1990)

1990 年度実績報告書

畠中寛大阪大学, たんぱく質研究所, 教授 (60208519)

[文献書誌] 小林春雄: "神経情報生物学入門" オ-ム社、東京, 243 (1990)