1990 年度実績報告書

ヒト染色体ディセクションによる外骨腫(がん抑制)遺伝子単離と腫瘍抑制機構

研究課題

研究課題/領域番号	02262103
研究機関	長崎大学
研究代表者	新川詔夫長崎大学, 医学部, 教授 (00111170)
研究分担者	孫田信一愛知県心身障害者コロニー発達障害研究所, 遺伝学部, 主任研究員 (00100165) 陣野吉廣長崎大学, 医学部, 助手 (20179097)
キーワード	染色体ミクロ切断 / がん抑制遺伝子 / 外骨腫遺伝子 / 遺伝子クロ-ニング / in situ hybridization
研究概要	<1.染色体顕微鏡切断・微量DNAクロ-ニング法の改良>___ー:(1)染色体標本作製時における短時間細胞固定および迅速分染、(2)切断片の乾燥状態での集積と微量(1nl)のproteinase K溶液・phenol/chloroformを用いたDNA抽出法の導入、(3)制限酵素NlaIIIに代わるSau3AIの採用による染色体DNAの消化、(4)染色体Sau3AI断片5'端に相補的な10mer linkerとそれに相補的な20mer primerの導入によるPCR、(5)psoralenー紫外線照射法の開発による汚染DNA混入防止、などの新しい手法の導入あるいは開発により、(1)では従来の染色体作製方法において生ずる染色体DNAの脱プリンやnickingを最小限に抑えること、(2)ー(5)ではクロ-ン取得効率の増大、PCR前及びその最中に生ずる汚染あるいは由来不明DNA混入を減少させることが可能になった。 <2.クロ-ンが8番染色体由来であることの検証>___ー:46個のクロ-ンをランダムに選択しプロ-ブとして、サザン法によりヒト全ゲノムDNA、ヒト8番染色体のみを含むヒト・マウス雑種細胞、およびマウス細胞とのhybridizationシグナルを調べた。46個中9個のクロ-ンでシグナルを検出した。うち6個はsingleーcopy DNAで、残りはrepetitive DNAであった。8q23ーq24のdissectionで得たPCR産物(2ug)をbiotinated duTPでラベルし、100ー500倍量のヒト全ゲノムDNAとの競合hybridizationの後、染色体上でfluorescence in situ hybridizationを行い、avidinーFITCと結合させた。8q23ーq24部位にFITCスポットを検出した。即ち、これらのクロ-ンは外骨腫遺伝子断片を含んでいる可能性が高い。 <3.陽性クロ-ンを用いたヒトゲノムDNAライブラリ-のスクリ-ニング>___ー:上記の陽性クロ-ンをプロ-ブにして、プラ-クhybridizationを行った。10万個のプラ-ク中陽性シグナルを2個に認めた。現在、このクロ-ンを用いてTRPS患者DNAを解析中である。

研究成果

(7件)

すべてその他

すべて文献書誌 (7件)

[文献書誌] 陣野吉廣,新川詔夫: "PCRを用いた染色体特定領域DNAの直接クロ-ニング法ーmicrodissectionーmicrocloning法ー" 実験医学. 8. 1052-1057 (1990)
[文献書誌] 新川詔夫: "PCRの原理とその応用ーPCRを利用した微量DNA材料からのクロ-ニング:マイクロディセクションで得た染色体DNAからのクロ-ニング" Cell Science. 6. 377-383 (1990)
[文献書誌] Jinno,Y.,Yoshiura,K.,Niikawa,N.: "Use of psoralen as extinguisher of contaminated DNA in PCR." Nuleic Acids Research. 18. 6739 (1990)
[文献書誌] jinno.Y.,Hirota,T.,Harada,N.,Niikawa,N.: "A sinple and efficient anplification method of DNA with unkuwn seguenees." Nuleic Acids Research.
[文献書誌] Niikawa,N.,Deng,HーX.,Abe,K.,Harada,N.,et al.: "Possible mapping of the gene for transient myeloproliferative syndrome at 21q11.2." Human Genetics.
[文献書誌] Hamabe,J.,Harada N,Abe K,Fukushima Y,et al.: "A molecular study of the PrederーWilli syndrome:Deletion,RFLP and phenotype analyses on 50 patients." American Journal of Medical Genetics.
[文献書誌] 新川詔夫 (分担執筆): "がんのバイオサイエンス" 東京大学出版会, (1991)

1990 年度 実績報告書

ヒト染色体ディセクションによる外骨腫(がん抑制)遺伝子単離と腫瘍抑制機構

研究代表者

新川 詔夫 長崎大学, 医学部, 教授 (00111170)

研究成果

[文献書誌] 陣野 吉廣,新川 詔夫: "PCRを用いた染色体特定領域DNAの直接クロ-ニング法ーmicrodissectionーmicrocloning法ー" 実験医学. 8. 1052-1057 (1990)

[文献書誌] 新川 詔夫: "PCRの原理とその応用ーPCRを利用した微量DNA材料からのクロ-ニング:マイクロディセクションで得た染色体DNAからのクロ-ニング" Cell Science. 6. 377-383 (1990)

[文献書誌] Jinno,Y.,Yoshiura,K.,Niikawa,N.: "Use of psoralen as extinguisher of contaminated DNA in PCR." Nuleic Acids Research. 18. 6739 (1990)

[文献書誌] jinno.Y.,Hirota,T.,Harada,N.,Niikawa,N.: "A sinple and efficient anplification method of DNA with unkuwn seguenees." Nuleic Acids Research.

[文献書誌] Niikawa,N.,Deng,HーX.,Abe,K.,Harada,N.,et al.: "Possible mapping of the gene for transient myeloproliferative syndrome at 21q11.2." Human Genetics.

[文献書誌] Hamabe,J.,Harada N,Abe K,Fukushima Y,et al.: "A molecular study of the PrederーWilli syndrome:Deletion,RFLP and phenotype analyses on 50 patients." American Journal of Medical Genetics.

[文献書誌] 新川 詔夫 (分担執筆): "がんのバイオサイエンス" 東京大学出版会, (1991)

1990 年度実績報告書

新川詔夫長崎大学, 医学部, 教授 (00111170)

[文献書誌] 陣野吉廣,新川詔夫: "PCRを用いた染色体特定領域DNAの直接クロ-ニング法ーmicrodissectionーmicrocloning法ー" 実験医学. 8. 1052-1057 (1990)

[文献書誌] 新川詔夫: "PCRの原理とその応用ーPCRを利用した微量DNA材料からのクロ-ニング:マイクロディセクションで得た染色体DNAからのクロ-ニング" Cell Science. 6. 377-383 (1990)

[文献書誌] 新川詔夫 (分担執筆): "がんのバイオサイエンス" 東京大学出版会, (1991)