下顎頭軟骨の骨化機構に関する発生学的、免疫組織学的、超微細構造学的研究

1990 年度 実績報告書

• 研究課題/領域番号: 02404070
• 研究機関: 東京医科歯科大学
• 研究代表者: 一條 尚 東京医科歯科大学, 歯学部, 教授 (20013807)
• 研究分担者: 柴田 俊一 東京医科歯科大学, 歯学部, 助手 (80187400) ; 大迫 正文 東京医科歯科大学, 歯学部, 助手 (60152104) ; 鹿野 俊一 東京医科歯科大学, 歯学部, 助手 (60114758) ; 寺島 達夫 東京医科歯科大学, 歯学部, 助教授 (20114770) ; 山下 靖雄 東京医科歯科大学, 歯学部, 教授 (70014157)
• キーワード: 軟骨内骨化 / 石灰化 / 結晶 / 免疫組織 / 器官培養 / モノクロナ-ル抗体

研究概要

1.下顎頭軟骨の初期石灰化部位における結晶の超微細構造に関する観察では、種々の発育段階のラットおよびマウス下顎頭を摘出後、直ちに化学固定を行い、また一部には液体窒素を用いた急速凍結置換固定法を適用し、未脱灰のまま樹脂包埋を行い、超薄切片を作製した。その後加速電圧300KVおよび200KVの超高圧透過電子顕微鏡を用いて、下顎頭軟骨初期石灰化部位の結晶構造について、直接原子配列レベルでの観察をおこない、初期石灰化部位の結晶には多数の構造欠陥が存在することが明かとなった。
2.下顎頭の軟骨細胞及び軟骨基質を抗原としたmonoclonal抗体の作製および免疫組織学的観察においては、ラット下顎頭軟骨のホモジネ-トを抗原として、、BalbCマウスを免疫し、その脾細胞とNSー1細胞とを融合させ、ハイブリド-マを作成した。その結果、下顎頭軟骨細胞と反応する単クロ-ン抗体が数種類得られた。
3.連続切片の作製による下顎頭軟骨の層構造の3次元的観察では、樹脂に包埋した下顎頭の連続切片を作製して、下顎頭軟骨内骨化部位で、形態学的特徴から軟骨細胞を層状に分類した。現在下顎頭の発育にともなう、骨内骨化部位の層状構造の変化を3次元画像解析装置を用いて、復構模型を作製してところである。
4.下顎頭の器官培養法による下顎頭軟骨細胞の分化発育の観察に関して、マウス胎生16.5日齢の胎仔の下顎頭を、無菌的に適出し、種々の培養条件で器官培養を行い、下顎頭軟骨の形態学的変化を観察した。その結果、予備実験ではアスコルビン酸および牛胎仔血清を添加したイシコフのMDMを培地として用いた場合が下顎頭の発育に最適であった。