B細胞初期分化についての研究

1991 年度 実績報告書

• 研究課題/領域番号: 02454193
• 研究機関: 熊本大学
• 研究代表者: 西川 伸一 熊本大学, 医学部, 教授 (60127115)
• 研究分担者: 林 眞一 熊本大学, 医学部, 助手 (50208617)
• キーワード: B細胞 / 血液幹細胞 / Cーkit / SLF / ストロマ細胞 / μ鎖

研究概要

これまでの研究では、B細胞初期分化を支持する増殖シグナルとしてリコンビナンILー7とILー7を発現しないストロマ細胞株PA6を使用してきたが、本年はPA6ストロマ細胞株の発現している分子の一つであるcーkitのリガンドSLFのB細胞増殖支持機能について検討した。
1.cーkitの細胞外ドメインを認識するモノクロ-ナル抗体を用いて、骨髄や培養中のB系細胞を染色した結果、B細胞分化がcーkit^+B220^ー未熟幹細胞からcーkit^+B220^+細胞を経てcーkit^ーB220^+細胞へ分化して行くことが明らかになった。
2.cーkitの機能を抑制するモノクロ-ナル抗体を培養に加えたり、マウスに直接投与する実験より、B系細胞の初期分化の過程で細胞表面に発現しているcーkitが細胞の増殖に必須のレセプタ-として機能していることが明らかになった。
3.リコンビナントSLFのB細胞増殖に及ぼす効果をPA6ストロマ細胞株と比較した。SLFとILー7を組み合わせて用いると、Cーkit^+B220^ー細胞は増殖し、B220^+段階にまで分化するが、PA6ストロマ細胞株そのものをSLFのかわりに用いた培養と比べると、細胞の増殖は極めて低いレベルにとどまっていた。この結果はILー7とSLF以外にもB細胞初期分化過程の細胞増殖を調節している分子の存在を示唆している。
4.B細胞は成熟に伴いcーkitを発現しなくなるが、これがB細胞分化のどのステ-ジに相当するのかについて、各段階で分化が停止している突然変異マウスやトランスジエニックマウスを用いて検討した結果、μ鎖が発現するまではcーkitで発現しており、μ鎖の発現と同時にその発現が抑制されることが明らかになった。
以上の結果からSLFはB細胞分化過程に関わる増殖因子として実際に機能していることが明らかになった。

研究成果

• [文献書誌] Takahiro kunisada: "ILー7 and B lymphopoiesis" Chemical Immunol. 51. 205-235 (1992)
• [文献書誌] Antonius Rolinks: "The cーkitーencoded tyrosine Kinase regulates the proliferation of earley preーB Cells" Eur.J.Immunol.21. 2609-2612 (1991)
• [文献書誌] Makoto Naito: "Abnormal differentiation of tissue macrophage population in osteopetrosis(op)mice defective in the production of macrophage colony stimulating factor." Am.J.Immunol. 139. 657-667 (1991)
• [文献書誌] Yasuhisa Matui: "Steel factor,the ligand for cーkit,is necessary,but not sufficient for the proliferation of murine primordial germ cells." Nature. 353. 750-752 (1991)
• [文献書誌] Yuji Gunji: "Support of early BーCell differentiation in mouse fetal liver by stromal cells and interleukinー7." Blood. 77. 2612-2617 (1991)
• [文献書誌] Akira Ohara: "Generation of B lymphocytes from a single hemopoietic progenitor cell in vitro." Int.Immunol.3. 703-709 (1991)
• [文献書誌] Seiji Okada: "Enrichment and characterization of murine hematopoietic stem cells that express cーkit molecule" Blood. 78. 1706-1712 (1991)
• [文献書誌] kazuya Yoshinaga: "Role of cーkit in mouse spermatogenesis;Identification of spermatogonia as aspecific site for cーkit expression and function." Development. 113. 689-699 (1991)
• [文献書誌] Satomi Nishikawa: "In utero manipulation of coat color formation by a monoclonal antiーcーkit antibody;Two distinct waves of cーkit dependency during melanocyte development." The EMBO J.10. 2111-2119 (1991)
• [文献書誌] Minetaro Ogawa: "Expression and function of cーkit in hemopoietic progenitor cells." J.Exp.Med.174. 63-71 (1991)
• [文献書誌] ShinーIchi Hayashi: "Exon Skipping by mutation of an authentic splice site of cーkit gene in W/W_ー mouse." Nucleic Acid Res.19. 1267-1271 (1991)
• [文献書誌] Takeshi Tubata: "Molecular and cellular aspects of Bーcell development." Current Opinion in Immunol.3. 186-192 (1991)
• [文献書誌] Hiroaki Kodama: "Response of newly established mouse myeloid leukemia cell lines in MC3T3ーG2/PA6 preadipocytes and hematopoーietic growth factors." Blood. 177. 49-54 (1991)
• [文献書誌] Takumi Era: "Differentiation of growth signal requirement of B lymphocyte precursor is directed by expression of immunoglobulin." The EMBO J.10. 337-342 (1991)