| 研究概要 |
家兎および人角膜,輪部上皮の培養条件を,種々の基本培養液(MCDB153,SHEMなど)を用いて検討した。この結果,MCDB153培養液を用いることにより血清無添加で培養を行うことが出来た。さらに,予備実験の段階であるが,培養液中のアミノ酸組成を変化させることにより,家兎角膜上皮細胞を従来の培養液より約10倍増殖させる新しい培養液を開発した。この培養液を用いることにより,培養角膜上皮を凍結保存し,再び常温に戻して細胞を使用することが可能となった。
人胎盤から精製,化学的に再重合させた4型コラ-ゲンシ-ト上で角膜上皮を培養し,上皮層を形成させることが出来た。この上皮細胞層は増殖能力を保持し,電顕的にも健常な細胞小器官が認められた。このコラ-ゲンシ-ト(培養上皮なし)を家兎角膜の実質内に移植し生体反応を観察した結果,血管新生などは発生せず反応性は極めて低かった。このシ-トが結膜組織の侵入を阻止する効果があることを臨床例で実証した。
角膜上皮細胞の細胞周期分析を行うフロ-サイトメトリ-法を開発した。この方法は培養細胞のみならず,in vivo角膜上皮細胞にも応用することが出来た。この方法を用いて,各種培養液で培養した上皮細胞の細胞周期や角膜上皮細胞に対するEGF点眼効果を検討した。
角膜上皮形成術の長期効果を研究し,モ-レン潰瘍に対する有効性を実証した。また,結膜上皮細胞が角膜実質を基質として再生した場合の上皮性状変化を臨床的に検討した。上皮スペキュラ-マイクロスコ-プと臨床結果から,人結膜上皮細胞は角膜実質が健常であれは,角膜上皮細胞となりえる可能性を認めた。
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