| 研究概要 |
コラ-ゲナ-ゼ・インヒビタ-遺伝子の発現調節に関与するプロモ-タ-部分のクロ-ニングを目的として実験した。
牛肺DNAを制限酵素EcoR1で消化後,それ等消化産物DNA断片の兩端にEcoR1カセットをT4ーDNAリガ-ゼにより結合させた。この兩端にEcoR1カセットを持ったDNA断片をヰ型として既知コラ-ゲナ-ゼ・インヒビタ-構造遺伝子の5^1末端から141〜160ヌクレオチドにわたる部分と相補的な合成ヌクレオチドS1とEcoR1カセット・プライマ-C1をプライマ-として耐熱性RNAポリメラ-ゼによるpolymerase chain reaction(PCR)をDNA thermal cyclerにより30サイクル行った。次に,このDNA産物をヰ型として,上記コラ-ゲナ-ゼ・インヒビタ-遺伝子の5^1末端から10〜29ヌクレオチドにわたる部分と相補的な合成ヌクレオチドS2及びEcoR1カセット・プライマ-C2をプライマ-として用いて上記と同様なpolymerase chain reactionによる増幅反応を行った。
その結果,約500bpの大きさのDNA産物を得ることが出来た。尚,このようなDNA産物は,予めEcoR1カセットを結合させるリガ-ゼ反応を行わない場合には産生されなかった。從って,この500bp DNA断片はEcoR1カセットにはさまれた部分のDNA,即ちM1遺伝子のプロモ-タ-を含むゲノムDNA部分であると考えられる。
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