優性遺伝子疾患の発症機構ーモデル動物による解析

1991 年度 実績報告書

• 研究課題/領域番号: 02454494
• 研究機関: 熊本大学
• 研究代表者: 前田 秀一郎 熊本大学, 医学部, 助教授 (10117244)
• キーワード: アミロイド-シス / トランスサイレチン(プレアルブミン) / 疾患モデルマウス / 相同DNA間組換え / 遺伝子標的組み込み / 胚性幹細胞 / 遺伝性疾患 / キメラマウス

研究概要

1)昨年度に得られたトランスサイレチン(TTR)遺伝子の一方のアレルに挿入変異が導入された6個の標的組み込み胚性幹(ES)細胞株をマウスの胚盤胞に注入し、キメラマウスの作製を試みた。この結果、1個のES細胞株から子孫に変異遺伝子を伝える生殖系列キメラマウスが得られた。
2)上記生殖系列キメラマウスと野性型マウスとの交配によって得られた71匹のF1マウスの約半数が、一方のTTR遺伝子に挿入変異が導入されたヘテロ接合体であった。このことは、ヘテロ接合体は、胎生期における発達段階において、特に障害を来たさないことを示唆するものと考えられる。ヘテロ接合体マウスには、外見上何の以上も認めなかった。
3)上記ヘテロ接合体同士の交配によって得られたF2マウスのうち約25%の頻度でホモ接合体が出現し、メンデルの分離比に従っていた。これらホモ接合体マウス血中にはTTRが全くないことをウェスタンブロット法で確認した。このことから、TTRは、発生の早期より、卵黄嚢や肝及び脈絡叢の原基で発現しているにもかかわらず、完全に欠損しても、胎生期において致死的ではないという新事実を明らかにした。現在、生後7ヶ月のこれらマウスには外見上、何の異常も認めていない。今後、発育状態や、病理組織学的、内分泌学的検討を加えることによって、TTRの生理的機能、特に神経系における役割を解析したいと考えている。また、点変異導入用のベクタ-を用いて、マウスES細胞のTTR遺伝子の第2エクソン内に、家族性アミロイドポリニュ-ロパチ-患者と同じ点変異を導入し、キメラマウス、さらに疾患モデルマウスの作製を試みる計画である。

研究成果

• [文献書誌] Ohuchi,K.et al.: "A Transgenic Mouse Line Developed to Express Human Amyloidogenic Transthyretin cDNA in the Brain" Biochem.Int.23. 809-817 (1991)
• [文献書誌] Tashiro,F.et al.: "Role of Serum Amyloid P Component for Systemic Amyloidosis in Transgenic Mice Carrying Human Mutant Transthyretin Gene" Gerontology. 37. 56-62 (1991)
• [文献書誌] Murakami,T.et al.: "A Novel Transthyretin Mutation Associated with Familial Amyloidotic Polyneuropathy" Biochem.Biophys.Res.Commun.182. 520-526 (1992)
• [文献書誌] Murakami,T.et al.: "Investigation of Effect of Serum Amyloid P Component Level on TransthyretinーDerived Amyloid Deposition in a Transgenic Mouse Model of Familial Amyloidotic Polyneuropathy" Am.J.Pathol.
• [文献書誌] Murakami,T.et al.: "in Amyloid and Amyloidosis 1990,An Attempt to Study the Role of Serum Amyloid P Component in the Formation of Amyloid Deposits in a Transgenic Mouse Model of Familial Amyloidotic Polyneuropathy" (Natvig.J.B.,Fφrre,φ.,Husby,G.,Husebekk,A.,Skogen,B.,Sletten,K.and Westermark,P.,eds.),Kluwer Academic Publishers,Dordrecht, 4 (1991)