日本人APRT欠損症の病因配列を標的とした遺伝子診断法とスクリ-ニング法の開発

1991 年度 実績報告書

• 研究課題/領域番号: 02454513
• 研究機関: 東京女子医科大学
• 研究代表者: 鎌谷 直之 東京女子医科大学, 医学部, 助教授 (00114447)
• 研究分担者: 箱田 雅之 東京女子医科大学, 医学部, 助手 (70208429)
• キーワード: 尿路結石症 / プリン代謝 / 突然変異 / 遺伝子診断

研究概要

Adenin phosphoribosyltransferase(APRT)欠損症は常染色体性劣性の遺伝病であり、尿路結石症と賢不全症を来たす。日本人に特に多い遺伝病であることがわかっている。確実に診断が出来れば、水分摂取、食事療法、薬物投与などにより尿路結石の発生と賢不全の進行を予防できることがわかっている。従って、確実な診断法を開発することには意味がある。我々はAPRT欠損症の遺伝子を分析した。方法はPCRで増幅したDNA断片の配列を決定し、突然変異が発見された後は、その変異を標的としたPCRーASOハイブリダイゼ-ションを用いる方法である。アイソト-プを用いない方法でも変異対立遺伝子が同定できた。以上の方法を用いた結果、141個のAPRT病因対立遺伝子(72の異なった家系から得られたもの:世界の全発表例の過半数)のうち96(68%)、30(21%)、10(7%)、1(1%)対立遺伝子はエクソン5のATGからACGへの塩基置換(APRT^*J)、エクソン3のTGGからTGAへの塩基置換、エクソン3の4bpの挿入、大きな遺伝子変化をそれぞれ持っていた。残りの4(3%)対立遺伝子については病因突然変異が不明であった。即ち、97%の病因遺伝子の突然変異を解明した。96%対立遺伝子はわずか3つの突然変異により説明できることがわかった。同じ突然変異を持った対立遺伝子はAPRT^*Jを除いてはすべて同じハプロタイプを有し、祖先遺伝子に由来することが強く示唆された。以上のように、日本人であればほとんどの患者に応用可能な遺伝子診断法を開発した。この方法を用いれば、今後患者だけでなく保因者診断なども簡単に行なうことが出来ると思われる。

研究成果

• [文献書誌] Hakoda,M.et al: "Homozygous Deficiency at anautosomal locus aprt in sonatic cells inviro Induced by two different mechanisms." Cancer Research. 50. 1738-1741 (1990)
• [文献書誌] kamatani,et al: "Identification of a compound heterozygote for APRT deficiency leading to 2,8-dihydroxyadenine urolithiasis." Human Genetics. 85. 505-509 (1990)
• [文献書誌] Kamatani,N.et al.: "Crossorers within a short DNA sequence indicate a long evolutionary history of APRT^*J mutation" Human Genetics. 85. 600-604 (1990)
• [文献書誌] Inshidate,T.et al: "Pseudodominant transmission of an autosomal recessive disease,APRT deficienuy." Journal of Pediatrics. 118. 90-91 (1991)
• [文献書誌] Hakoda,M.et al.: "Diagnosis of heterozygous states for APRT deficiency based on detection of in vero somatic mutants in bloud T-cells." Americal Journal of Human Genetics. 48. 522-562 (1991)
• [文献書誌] Kamatani,N.et al.: "Only three mutations account for almost all defective alleles causing APRT deficiency among Japanese patients"