哺乳類受精の分子機構の解明とその外来遺伝子導入技法開発への応用

1991 年度 実績報告書

• 研究課題/領域番号: 02454523
• 研究機関: 東京大学
• 研究代表者: 森 庸厚 東京大学, 医科学研究所, 助教授 (40012760)
• 研究分担者: 天野 卓 東京農業大学, 畜産学科, 助教授 (90078147) ; 野瀬 清 東京大学, 医科学研究所, 助教授 (70012747)
• キーワード: 卵透明帯 / 糖鎖 / 精子 / MHCクラスII分子 / 卵子 / CD_4〓分子 / P56lck / 受精の情報伝達

研究概要

これまでにTSKーHPLC用カラム(DEAE5PW,phenylー5pwなど)を購入し、これを使用して透明帯糖蛋白質アスパラギン結合型中性糖鎖、酸性糖鎖の構造解析を終え、非還元末端に露出したNーアヤチルグルコサシン残基の3位に結合する糖鎖など精子のリガンドとしての可能性を示す特徴的な構造を見い出し論文に発表してきた。また、精子側レセプタ-として、アクロシン以外の38KDaの透明帯結合活性のある蛋白質を精製し、その部分的アミノ酸配列を決定した。精子と卵子卵黄膜が接着し、融合する段階で仂く認識分子についても、前報にひきつづいて、さらに精子のMHCクラスII分子の発現をimmuno blotting法で同定し、そのサイズは体細胞のBcellのそれと同じ大きさであることを確認している。また、卵子側のCD_4〓分子の発現をやはりimmuno blotting法で同定し、Tcellなどに発現している分子と異なったサイズの大きさであることを見い出している。また精子を抗MHCクラスIIモノモムフィック部位に対する抗体で処理し、卵子を抗CD4抗体で処理することによって両配偶子間の接着阻害ひいては受精阻害がおこることから、両分子の受精への関与が強く示唆された。次にこのCD_4〓分子に会合するP56lck分子の発現を卵黄膜直下に見い出し、抗CD_4抗体で卵子を架橋することによってP56lck分子の自己リン酸化反応がおこることも確認している。そしてこの両分子の情報伝達複合体部分のmRNAレベルでの発現をRT/PCR法で同定し、塩基配列を決定し、論文にとりまとめ発表した。

研究成果

• [文献書誌] Mori,E.et.Al.: "Neutral oligosaccharide structures linked to asparagines of porcine zona pellucida glycoproteins" Biochemistry. 30. 2078-2087 (1991)
• [文献書誌] Mori,T.et.al.: "Expression of CD4ーlike structure on murine egg vitelline membrane and its signal transductive roles through p56lck in fertilization" Am.J.Reprod.Immunol.(1992)
• [文献書誌] Mori,T.et.al.: "Expression of the signal transducing region of CD4ーlike and lck genes in murine egg" Biochem.Biophys.Res.Commun.182. 527-533 (1992)
• [文献書誌] Mori,T.: "細胞性免疫" 臨床婦人科産科. 46. 142-144 (1992)
• [文献書誌] Mori,T.et.al.: "生殖・腫瘍免疫と糖鎖" 蛋白質 核酸 酵素. (1992)
• [文献書誌] Mori,T.: "Immunobiological studies on the mammalian fertilization and implantation.In “Biology of Germ Linesーin Animals and Man"" Jap.Sci.Soc.Press, (1992)