| 研究概要 |
大腸菌では、放射線や多くの化学変異原による突然変異の誘発には、RecAタンパク,UmuD,UmnCタンパク(およびそのアナログでプラズミド由来のMucA,MucBタンパク),Ruva,RuvB,RuvCタンパク,DNAポリメラーゼなどが関与することが知られている。本研究においては、これらのタンパクの諸機能を生代学的に研究し、突然変異生成の分子機構の解明をめざした。本研究の期間中に以下の成果を得た。
1.放射線などのDNA損傷によって細胞中で活性化されたRecAタンパクがUmuDタンパクおよびMucAタンパクの切断反応を促進し、切断された産物が突然変異生成反応における活性型であることを証明した。
2.大腸菌のDNAポリメラーゼIIをコードするpolB遺伝子をクローニングして解析し、LexAによって発現が抑制されるSOS遺伝子であることを証明した。次にDNAポリメラーゼIIは構造的にも、機能的にも、真核生物の染色体複製酵素であるα型DNAポリメラーゼによく似ていることを明らかにした。更にpolB完全欠失株を作成して解析した結果、polBは紫外線による損傷の修復と突然変異誘発には必要でないことを明らかにした。
3.RnvAおよびRuvBタンパクを精製し、両者は複合体を形成して、相固約DNA組換元の中間体であるHolliday構造に結合して、ATP分解のエネルギーを利用して、DNA鎖の交換反応を触媒して、branchmigrationを促進する機能をもつことを生化学的に証明した。
4.RuvCタンパクはHolliday構造を特異的に切断して、組換元体を分離するエンドヌクレアーゼであることを生化学的に説明した。
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