| 研究分担者 |
杉本 宣敬 有機合成薬品工業工業, 生化学研究室, 室長
大島 一里 北海道大学, 農学部, 助手 (00176869)
上田 一郎 北海道大学, 農学部, 助教授 (10113523)
小島 誠 新潟大学, 農学部, 教授 (00001454)
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| 研究概要 |
1)種々のウイルス・ウイロイド核酸についてcDNAを作成し、塩基配列を決定して増幅用プライマ-及び検出用プロ-ブを設計した。イネウイルスでは、イネ萎縮ウイルスのゲノムセグメントS1,S3,S4,イネ黒条萎縮ウイルスのゲノムセグメント10,イネラギッドスタントウイルスのゲノムセグメント9,マメ類ウイルスでは、インゲンマメ黄班モザイクウイルス,クロ-バ-yellow veinウイルス,ダイズモザイクウイルスの3'末端近傍領域,ジャガイモウイルスでは、ジャガイモYウイルスの外被蛋白質領域,ウイロイドでは、セイヨウナシくぼみ果ウイロイドについてcDNAを作成し、その塩基配列を決定した。
2)これらの塩基配列を基にして、RNAからcDNAを合成し増殖する(RTーPCR)種々の条件を検討した。PCRプライマ-の設計と合成,それらプライマ-を用いた標的遺伝子の増殖試験の行っておおよそ期待した結果が得られた。
3)RTーPCR操作に伴うコンタミネ-ションの防止に就いては、必要な操作基準を確立した。
4)ハイブリダイゼ-ションによる遺伝子診断を32P標識プロ-ブと酵素標識プロ-ブ(DIG)を併用し検出感度を比較したところDIG法は、アイソト-プ標識に較べて10倍高かった。
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