| 研究課題/領域番号 |
02556007
|
|---|
| 研究機関 | 北海道大学 |
|---|
研究代表者 |
四方 英四郎 北海道大学, 名誉教授 (00001389)
|
|---|
| 研究分担者 |
杉本 宣敬 有機合成薬品工業(株), 生化学研究室, 室長
大島 一里 佐賀大学, 農学部, 助手 (00176869)
上田 一郎 北海道大学, 農学部, 助教授 (10113523)
小島 誠 新潟大学, 農学部, 教授 (00001454)
|
|---|
| キーワード | PCR / 遺伝子診断 / 植物ウイルス / 塩基配列 / マイクロハイブリダイゼーション |
|---|
| 研究概要 |
1)ジャガイモYウイルスとホップ潜在ウイロイドについて、PCRとDIG標識核酸プローブを用いたマイクロプレートハイブリダイゼーション法による遺伝子診断を確立した。圃場でジャガイモYウイルスに感染したジャガイモを常法のELISA、PCR、およびマイクロプレート法で検定。ELISAで検出できない感染株でもPCRとマイクロプレート法で検出できた。更にマイクロプレート法はPCRより検出感度が10倍優れていた。
2)イネラギッドスタントウイルス変異株の変異遺伝子(ゲノムセグメント9)をRTーPCRとSSCP(Single-strand conformation polymorphisms)によって識別・検出する方法を確立した。保毒虫ー頭から抽出した核酸の1/2量より合成したcDNAの1/100量あるいは感染イネ1mg分より合成したcDNAの1/50量からでも充分にPCR検定が可能であった。
3)ジャガイモ葉巻ウイルス外被蛋白質で形質転換したジャガイモより抽出したゲノムDNAを鋳型として、PCRとマイクロプレートハイブリダイゼーションで、導入された遺伝子の検出に成功した。
4)PCR法増幅の鋳型はDNAなので、検定植物よりウイルスRNAを抽出してより簡便にcDNAを調製する方法を確立することがPCRによる遺伝子診断法の基本となる。ジャガイモYウイルス、ジャガイモ葉巻ウイルス、イネ萎縮ウイルス、クローバーイエローベインウイルスについてウイルスゲノムRNAの直接簡易抽出法とcDNA調製法を確立してPCRによる遺伝子診断法を確立した。
|
