| 研究概要 |
1.チャ葉から単離精製したクロロプラスト型アイソザイムをリシルエンドペプチダ-ゼで分解し、全体の64%に相当するペプチド断片のアミノ酸配列を決定した。そのうち、一ペプチドのアミノ酸配列は、グアヤコ-ルペルオキシダ-ゼおよびチトクロムcペルオキシダ-ゼのヘムの5番目のリガンドであるプロキシマルヒスチジンを含む領域に対応していた。アスコルビン酸ペルオキシダ-ゼ由来ペプチドのアミノ酸配列は、植物のグアヤコ-ルペルオキシダ-ゼよりもむしろ酵母のチトクロムcペルオキシダ-ゼに類似していた。また3つのペプチドはトウモロコシのトリオ-スリン酸イソメラ-ゼとホモロジ-を示した。アミノ酸配列の相同性、および酵素学的性質の分析から、過酸化水素の消去に機能しているペルオキシダ-ゼは、電子供与体が異なってはいるが、共通の祖先に由来するものと思われる。
2.ホウレンソウ葉緑体から、チラコイド膜結合性のアスコルビン酸ペルオキシダ-ゼ(APX)を発見した。チラコイドとストロマ画分のAPX活性比は1:1であった。チラコイド結合APXはPSIの多いストロマチラコイドに局在していた。この酵素はOctylglucoside,CHAPSOにより可溶化され、、DEAE-Sephacel,Superdex200,QAE Toyopearl,Superdex75を用いるクロマトグラフィにより、順次精製した。精製酵素はSDS-PAGEで32kDの分子量を示した。この酵素は可溶性酵素と同様、KCNおよびpCMB,DTNBにより阻害されアスコルビン酸のない液中ではt_<1/2>=15sで失活した。また、光照射チラコイドで生成する過酸化水素をチラコイド膜結合APXが実際に消去することおよびこの酵素の反応生成物であるモノデヒドロアスコルビン酸ラジカルがチラコイドにより光還元されることを見いだした。
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