| 研究課題/領域番号 |
02557073
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| 研究機関 | 愛知学院大学 |
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研究代表者 |
吉村 文信 愛知学院大学, 歯科部, 教授 (50001962)
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| 研究分担者 |
加藤 煕 北海道大学, 歯学部, 教授 (60001020)
中垣 晴男 愛知学院大学, 歯学部, 教授 (10097595)
池田 健 愛知学院大学, 歯学部, 講師 (80241131)
小佐野 悦雄 愛知学院大学, 歯学部, 講師 (80110998)
日比 栄子 愛知学院大学, 歯学部, 講師 (50097606)
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| キーワード | 歯周病原性細菌 / 線毛 / 血球凝集素 / 外膜蛋白質 / ポルフィロモナスジンジバリス / 遺伝子 / 塩基配列の決定 |
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| 研究概要 |
歯周病理原細菌であるPorphyromonas gingivalisの保有する病原因子(線毛・血球凝集素・表層蛋白質)の遺伝子を解析することによって歯周病の新しい予防、診断、治療法を開発することを目的としてきた。申請者らによって線毛を構成する主要蛋白質の遺伝子(fimA)はすでにクローン化され、塩基配例が決定されている。この遺伝子の上流に63K、下流の50Kおよび80K蛋白質をコードしている遺伝子がそれぞれあることを明らかにしてきたが、これら蛋白質に対する特異抗体を家兎抗体として調整した。50K蛋白質は、他の蛋白質の混入をふせぐために、C末端がちぎれた45K*蛋白質を合成するリコンビナントを使い、この蛋白質として精製した。45K*蛋白質は他の蛋白質よりかなり多量に合成されることから、より純度の高い標品が得られた。常法に従って家兎に免疫し、それぞれの特異抗体を得た。これらの抗体を使って、各蛋白質が菌体のどこに存在するのかをまず探索したところ、特に50K、80K蛋白質は、精製綿毛の分画に濃縮され、線毛を構成する微量成分であろうと考えられる実験結果を得た。すなわち、これら抗血清を使って、イムノ・ブロット法にて、本菌の各種分画中から、特異的に反応する蛋白質を探索したところ、精製線毛に存在する微量成分の、それぞれ50K、80Kに相当する蛋白質と反応し、それ以外の分画では反応する蛋白質を見つけられなかった。63K蛋白質の本菌における所在は決定できなかった。この蛋白質は本菌ではきわめて小量しか発現していなく、検出感度以下の量しか存在しない可能性も考えられる。塩基配列の決定は進展し、50K、80Kの蛋白質をコードする遺伝子の塩基配列に関してはほぼ完成しているが、なおまだ発表するまでに至っていない。本菌のプロテアーゼ活性をもった血球凝集素を均一に精製し、その遺伝子の一部をクローン化した。
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