1991 年度実績報告書

活性化血小板を認識するモノクロ-ナル抗体およびその誘導体による血栓症治療法の開発

研究課題

研究課題/領域番号	02557115
研究機関	(財)東京都臨床医学総合研究所
研究代表者	田上憲次郎東京都臨床医学総合研究所, 循環器病研究部, 研究員 (30014137)
研究分担者	岩佐進武田薬品工業株式会社, 研究開発本部・生物工学研究所, 研究員藤本司昭和大学藤が丘病院, 脳外科, 助教授 (60014180) 鈴木英紀東京都臨床医学総合研究所, 循環器病研究部, 研究員 (30158977) 赤松紀子東京都臨床医学総合研究所, 循環器病研究部, 研究員 (30124431) 山崎博男実践女子大学, 家政学部, 教授 (50013826)
キーワード	活性化血小板 / モノクロ-ナル抗体 / 実験的血栓 / GMP-140(PADGEM) / 線維素溶解能 / ウロキナ-ゼ / 体外循環 / 二重特異性モノクロ-ナル抗体
研究概要	当研究部にて作成したヒト活性化血小板に特異的に結合するモノクロ-ナル抗体2T60の対応抗原は、血小板のα顆粒膜のGMP-140(PADGEM)であり、本抗体はまた活性化家兎血小板に対しても反応し、家兎血小板のα顆粒の膜にもGMP-140類似の膜糖蛋白が存在することを証明した。本抗体の血栓性疾患への臨床的応用のために、2T60抗体を用いて、血栓形成の指標とされる流血中の活性化血小板の検出をFACSを用いて試みた。正常人血小板に対して、対照正常マウスIgGの結合に比し、2T60抗体は全例で常に高い結合を示し、正常血小板も軽度のGMP-140をその表面に有することを証明した。次に腎不全患者の人工透析の際に比較すると、透析前に比し、透析開始30分後には有意に2T60抗体を結合し得る血小板(2T60陽性血小板)が増加した。また人工心肺装置を用いる心臓手術においても、人工心肺装置の開始の120分後には、流血中の血小板数は術前の約70%にまで減少するが、2T60陽性血小板はその陰性血小板よりも大きなピ-クを形成し、流血中の半数以上の血小板が活性化されることが解明された。これらの成績は本2T60抗体によって流血中の活性化血小板の検出が可能であることを示し、血栓症の診断に対し有力な方法を提供するものである。一方、昨年度われわれは2T60抗体をUrokinase(UK)で免疫したマウス脾細胞と融合して、GMP-140とUKの双方にbispecificなモノクロ-ナル抗体UP4-33の作成に成功した。われわれがすでに開発した家兎の内頸動脈にアラキドン酸を注入して中大脳動脈領域に血栓を形成する実験系で、あらかじめUP4-33抗体をUKを混合して全身投与しておくと、対照のUK単独投与群に比し、該領域における血液のextravasationが有意に(p<0.05)抑制された。このことは血栓部位に取り込まれた活性化血小板に、UP4-33に結合したUKが抗体のtargetting作用により集中した結果であると考えられた。

研究成果
(8件)

すべてその他

すべて文献書誌 (8件)

[文献書誌] Yasuhiro Katagiri: "Characterization of platelet aggregation induced by the human melanoma cell line HMV-1:Roles of heparin,plasma adhesive proteins and tumor cell membrnane proteins." Cancer Research. 51. 1286-1293 (1991)
[文献書誌] Naomasa Yamamoto: "Glycoprotein Ib (GPIb)-dependent and GPIb-independent pathways of thrombin-induced platelet activation." Blood. 77. 1740-1748 (1991)
[文献書誌] Naomasa Yamamoto: "Normal aggregation of glycoprotein IV (CD36)-deficient platelets from seven healthy Japanese donors." Brit.J.Haematol.(1992)
[文献書誌] Kazuhiko Ito: "Antibody removal therapy used successfully at delivery of a pregnant patient with Glanzmann′s thrombasthenia and multiple anti-platelet antibodies." Vox Sang.61. 40-46 (1991)
[文献書誌] Kenjiro Tanoue: "Detection of in vivo activated platelets in experimental cerebral thrombosis in rabbits:Studies by a new monoclonal antibody,2T60,specific for the activated platelets of both humans and rabbits." Submitted. (1992)
[文献書誌] Yasuhiro Katagiri: "Localization of von Willebrand factor and thrombin-interactive domains on human platelet glycoprotein Ib." Thromb.Haemostas.63. 122-126 (1990)
[文献書誌] 田上憲次郎(分担執筆);山中學、山崎博男(編集): "血小板:トロンビンと血小板の相互反応(p.51-54),GPIbとvWF(p.90-94)GMP-140(p.103-104),膜荷電(p.149-151)" 医学書院, 14 (1991)
[文献書誌] 田上憲次郎(分担執筆)(柴田昭、花岡正男編): "新版日本血液学全書:分子血液学;血小板異常症" 丸善, 11 (1990)

1991 年度 実績報告書

活性化血小板を認識するモノクロ-ナル抗体およびその誘導体による血栓症治療法の開発

研究代表者

田上 憲次郎 東京都臨床医学総合研究所, 循環器病研究部, 研究員 (30014137)

研究成果

[文献書誌] Yasuhiro Katagiri: "Characterization of platelet aggregation induced by the human melanoma cell line HMV-1:Roles of heparin,plasma adhesive proteins and tumor cell membrnane proteins." Cancer Research. 51. 1286-1293 (1991)

[文献書誌] Naomasa Yamamoto: "Glycoprotein Ib (GPIb)-dependent and GPIb-independent pathways of thrombin-induced platelet activation." Blood. 77. 1740-1748 (1991)

[文献書誌] Naomasa Yamamoto: "Normal aggregation of glycoprotein IV (CD36)-deficient platelets from seven healthy Japanese donors." Brit.J.Haematol.(1992)

[文献書誌] Kazuhiko Ito: "Antibody removal therapy used successfully at delivery of a pregnant patient with Glanzmann′s thrombasthenia and multiple anti-platelet antibodies." Vox Sang.61. 40-46 (1991)

[文献書誌] Kenjiro Tanoue: "Detection of in vivo activated platelets in experimental cerebral thrombosis in rabbits:Studies by a new monoclonal antibody,2T60,specific for the activated platelets of both humans and rabbits." Submitted. (1992)

[文献書誌] Yasuhiro Katagiri: "Localization of von Willebrand factor and thrombin-interactive domains on human platelet glycoprotein Ib." Thromb.Haemostas.63. 122-126 (1990)

[文献書誌] 田上 憲次郎(分担執筆);山中 學、山崎 博男(編集): "血小板:トロンビンと血小板の相互反応(p.51-54),GPIbとvWF(p.90-94)GMP-140(p.103-104),膜荷電(p.149-151)" 医学書院, 14 (1991)

[文献書誌] 田上 憲次郎(分担執筆)(柴田 昭、花岡 正男 編): "新版日本血液学全書:分子血液学;血小板異常症" 丸善, 11 (1990)

1991 年度実績報告書

田上憲次郎東京都臨床医学総合研究所, 循環器病研究部, 研究員 (30014137)

[文献書誌] 田上憲次郎(分担執筆);山中學、山崎博男(編集): "血小板:トロンビンと血小板の相互反応(p.51-54),GPIbとvWF(p.90-94)GMP-140(p.103-104),膜荷電(p.149-151)" 医学書院, 14 (1991)

[文献書誌] 田上憲次郎(分担執筆)(柴田昭、花岡正男編): "新版日本血液学全書:分子血液学;血小板異常症" 丸善, 11 (1990)