1991 年度実績報告書

遺伝子診断用核酸分子集合体に関する研究

研究課題

研究課題/領域番号	02650649
研究機関	京都工芸繊維大学
研究代表者	村上章京都工芸繊維大学, 繊維学部, 助教授 (60210001)
研究分担者	牧野圭祐京都工芸繊維大学, 繊維学部, 教授 (50159141)
キーワード	遺伝子診断 / 蛍光ラベルDNAプロ-ブ / スピンラベルDNAプロ-ブ / 蛍光偏光解消 / 蛍光異方性 / ESRスペクトル / M13ファ-ジDNA / DNAプロ-ブ法
研究概要	本研究は難治性疾患の遺伝子診断に物する基礎的方法論の確立に関するものである。初年度において蛍光剤(フルオレセイン)で修飾した核酸分子集合体(蛍光ラベルDNAプロ-ブ)、電子スピン(2、2、6、6ーテトラメチルピペリジンーNーオキシル)で修飾した核酸分子集合体(スピンラベルDNAプロ-ブ)の分子設計ならびに合成、精製法ならびに同定法を確定した。さらに今年度にかけて、それらDNAプロ-ブと相補的な単鎖核酸(5〜30量体)との相互作用を検討した結果、蛍光偏光解消による蛍光異方性の増加ならびにESRスペクトルの線幅に大きな変化がみられた。これは2重鎖形成がそれらDNAプロ-ブによってモニタ-できること、言い換えれば、溶液中で分光法を用いるのみで対象遺伝子の存在が容易にモニタ-できることを示している。これらの結果を踏まえ、今年度は天然の巨大DNA(数千塩基以上)を検出することを試みた。対象遺伝子としては分子量238万のM13ファ-ジDNAを選び、比較対照DNAとして、その一部塩基配列を欠落させたM13ファ-ジDNA変異体を遺伝子組換え技術により作製した。ラベルDNAプロ-ブをそれぞれのDNAと共存させた場合、対象ファ-ジDNAの系でのみスペクトルに大きな変化が見られた。これは初年度の結果から2重鎖形成による変化と考えられ、溶液中でM13ファ-ジDNAが選択的に検出できたことを示している。本研究でラベルDNAプロ-ブを用いて基礎的分析法を確立した液相遺伝子診断法は、今後、検出感度の上昇やラベル剤の改良によって充分実用に足る遺伝子診断法になるものと考えられる。

研究成果
(10件)

すべてその他

すべて文献書誌 (10件)

[文献書誌] H.Ozaki: "Syntheses and properties of oligoadenylate analogs containing stereoregulated phosphoromorphoridate and phosphodiester linkages in an alternating manner." Bull.Chem.Soc.Japan. 63. 1929-1936 (1990)
[文献書誌] 村上章: "機能性アンチセンスDNAの化学合成." 有機化学協会誌. 48. 180-193 (1990)
[文献書誌] 村上章: "ラベルDNAプロ-ブによる遺伝子自動分析" 病態生理. 9. 851-857 (1990)
[文献書誌] A.Murakami.: "Fluoresceinーlabeled oligonucleotide probe:Detection of hybrid formation in solution by fluorescence polarization spectroscopy." Nucleic Acids Res.19. 4097-4102 (1991)
[文献書誌] K.Makino: "Polymerーbound electron sin for enzyme assay in a DNA Probe method." Reactive Polymers. 15. 177-183 (1991)
[文献書誌] 村上章: "遺伝子を制御するアンチセンスDNA法" 化学. 46. 681-684 (1991)
[文献書誌] S.Nagahara: "Spinーlabeled oligonucleotides site specifically labeled at internucleotide linkage.Saparation of stereoisomeric probes and EPR spectroscopical detection of hybrid formation in solution." Nucleosides&Nucleotides.
[文献書誌] K.Makino: "Detection of specific base sequences in solution using DNA probes labeled with Dーand/or 15N substituted spinーlabels." Free Radical Res.Comms.
[文献書誌] A.Murakami: "Oligonucleotides siteーspecifically spinーlabeled at 5'ーterminal or internucleotide linkage and their use in gene diagnosis." Free Radical Res.Comms.
[文献書誌] 牧野圭祐: "「1本鎖DNAの精製」(「タンパク質・ペプチドの高速液体クロマトグラフィ(II)」、池中徳治、崎山文夫編)" 化学同人, 328 (1990)

1991 年度 実績報告書

遺伝子診断用核酸分子集合体に関する研究

研究代表者

村上 章 京都工芸繊維大学, 繊維学部, 助教授 (60210001)

研究成果

[文献書誌] H.Ozaki: "Syntheses and properties of oligoadenylate analogs containing stereoregulated phosphoromorphoridate and phosphodiester linkages in an alternating manner." Bull.Chem.Soc.Japan. 63. 1929-1936 (1990)

[文献書誌] 村上 章: "機能性アンチセンスDNAの化学合成." 有機化学協会誌. 48. 180-193 (1990)

[文献書誌] 村上 章: "ラベルDNAプロ-ブによる遺伝子自動分析" 病態生理. 9. 851-857 (1990)

[文献書誌] A.Murakami.: "Fluoresceinーlabeled oligonucleotide probe:Detection of hybrid formation in solution by fluorescence polarization spectroscopy." Nucleic Acids Res.19. 4097-4102 (1991)

[文献書誌] K.Makino: "Polymerーbound electron sin for enzyme assay in a DNA Probe method." Reactive Polymers. 15. 177-183 (1991)

[文献書誌] 村上 章: "遺伝子を制御するアンチセンスDNA法" 化学. 46. 681-684 (1991)

[文献書誌] S.Nagahara: "Spinーlabeled oligonucleotides site specifically labeled at internucleotide linkage.Saparation of stereoisomeric probes and EPR spectroscopical detection of hybrid formation in solution." Nucleosides&Nucleotides.

[文献書誌] K.Makino: "Detection of specific base sequences in solution using DNA probes labeled with Dーand/or 15N substituted spinーlabels." Free Radical Res.Comms.

[文献書誌] A.Murakami: "Oligonucleotides siteーspecifically spinーlabeled at 5'ーterminal or internucleotide linkage and their use in gene diagnosis." Free Radical Res.Comms.

[文献書誌] 牧野 圭祐: "「1本鎖DNAの精製」(「タンパク質・ペプチドの高速液体クロマトグラフィ(II)」、池中徳治、崎山文夫編)" 化学同人, 328 (1990)

1991 年度実績報告書

村上章京都工芸繊維大学, 繊維学部, 助教授 (60210001)

[文献書誌] 村上章: "機能性アンチセンスDNAの化学合成." 有機化学協会誌. 48. 180-193 (1990)

[文献書誌] 村上章: "ラベルDNAプロ-ブによる遺伝子自動分析" 病態生理. 9. 851-857 (1990)

[文献書誌] 村上章: "遺伝子を制御するアンチセンスDNA法" 化学. 46. 681-684 (1991)

[文献書誌] 牧野圭祐: "「1本鎖DNAの精製」(「タンパク質・ペプチドの高速液体クロマトグラフィ(II)」、池中徳治、崎山文夫編)" 化学同人, 328 (1990)