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本研究は、林木のプロトプラストの単離法および単離されたプロトプラストの培養法を明らかにすることを目的としている。本年度は、昨年度までに明らかにされたシラカンバおよびクヌギのプロトプラスト単離法を用い、単離されたプロトプラストの培養法の開発について重点的に研究を行なった。その結果、クヌギ成熟胚から誘導された体細胞胚培養系を材料として単離されたプロトプラストを、硝酸アンモニウムを除いたMS培地中で培養し、徐々に浸透圧を低くすることによってコロニ-を得た。さらに、得られたコロニ-を回転培養することにより、カルスを誘導することが可能であることを明らかにした。また、クヌギ体細胞胚に用いたプロトプラスト単離法が、同属のコナラの体細胞胚についても適用可能であり、分裂可能な活力に富むプロトプラストが単離できることを明らかにした。しかし、シラカンバ幼植物体の葉からの葉肉プロトプラストの単離では、単離されたプロトプラストが材料植物の生育状態によって単離後わずかの時間に破裂してしまう現象が見られた。これを解決するため、DTTの添加等について検討し有効な方法を明らかにした。それとともに、この手法をチョウセンヤマナラシの幼植物体の葉からのプロトプラスト単離への適用を検討し、有効であるとの結論を得た。今後は、再生したクヌギカルスから不定胚の誘導を行なうとともに、他樹種についてプロトプラスト培養実験を進める予定である。
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