| 研究課題/領域番号 |
02670588
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| 研究機関 | 慶応義塾大学 |
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研究代表者 |
安藤 暢敏 慶應義塾大学, 医学部, 講師 (90101972)
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| 研究分担者 |
愛甲 聡 慶應義塾大学, 医学部, 助手 (70202439)
北川 雄光 慶應義塾大学, 医学部, 助手 (20204878)
長島 敦 慶應義塾大学, 医学部, 助手 (80198316)
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| キーワード | ハイブリッド型人工食道 / 正常ヒト食道上皮細胞培養 / コラーゲンゲル培養 / 再構築型人工食道 / 移植 |
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| 研究概要 |
ハイブリッド型人工食道開発のため、正常ヒト食道上皮を用いて以下の実験をおこなった。
1.正常ヒト食道上皮細胞の初代培養法の検討
ヒト食道上皮細胞の初代培養において、ディスパーゼとトリプシンを用いることにより確実で効率の良い培養法を確立した。本法を用いることにより、0.5cm^2の食道粘膜より約1週間で30cm^2cmの面積のシャーレをconfluentにすることが可能となった。種々の条件で培養状態を検討した結果、無血清培地(KGM)は細胞の増殖に適すること、血清の添加は細胞の分化を誘導し増殖を阻害すること、プラスチックシャーレをコラーゲンコーティングした方が細胞接着が良好であることがわかった。
2.正常ヒト食道上皮細胞のコラーゲンゲル培養法の検討
1.で確立した方法を用いて、ヒト食道上皮細胞のコラーゲンゲル上での培養(付着コラーゲンゲル培養)に成功した。さらにコラーゲンゲルを浮遊させる(浮遊コラーゲンゲル培養)ことにより培養細胞は3〜4層に重属化し、細胞は球形化しより生体に近い形態を示した。
3.培養ヒト食道上皮細胞シートの作製とヌードマウス広背筋への移植実験
2.の浮遊コラーゲンゲル培養で作製された培養食道上皮細胞とコラーゲンゲルからなるシートを、ヌードマウス広背筋表面に移植した。移植した培養食道上皮細胞は生着し徐々に重層化の程度を増加させ、移植16日までにほぼ生体に近い状態に再構築された。また、コラーゲン層内へは結合織の進入と血管新生の増生が認められた。
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