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1992 年度 研究成果報告書概要

ヒト血清アルブミンの薬物結合位のX線結晶構造解析

研究課題

研究課題/領域番号 02670984
研究種目

一般研究(C)

配分区分補助金
研究分野 物理系薬学
研究機関名古屋市立大学

研究代表者

黒野 幸久  名古屋市立大学, 薬学部, 講師 (50080205)

研究分担者 池田 憲  名古屋市立大学, 名誉教授 (50080164)
太田 直子  名古屋市立大学, 薬学部, 助手 (50117818)
四柳 智久  名古屋市立大学, 薬学部, 教授 (40080189)
研究期間 (年度) 1990 – 1992
キーワードヒト血清アルブミン / 薬物結合 / X線結晶講造解析 / 結晶化 / 酵素的活性 / 酵素反応速度論 / キャラクタリゼーション
研究概要

1.ヒト血清アルブミン(HSA)の結晶化:HSAの結晶化には蒸気拡散法が最適と考え、脱脂精製したHSA(Fraction V)の結晶化を試みた。板状や針状結晶が再現性よく観察された。しかし0.1-0.2mmの大きさまでしか成長しなかった。X線解析を行うには、0.5-2.0mm程度の結晶が必要である。HSAの純度をSDS-PAGEにより調べたところ、単量体以外のものが数%含まれていた。そこでゲル濾過法により単量体のみを分取し、結晶の成長をはかった。その結果0.4-0.5mmのものが得られた。
2.Acyl-HSAの結晶化:p-Nitrophenyl acetate及びcinnamoylimidazoleとHSAを反応させR-siteをアシル化した。副生成物を透析で除去し、acyl-HSA溶液を凍結乾燥した。このacyl-HSAについて結晶化を試みた。0.2-0.3mmの小さい結晶が得られた。
3.HSAの薬物結合部位のキャラクタリゼーション:HSAの酵素的活性を利用して薬物結合部位のキャラクタリゼーションを行うという、我々が従来開発した方法で詳細な検討を行い、X線構造解析の結果と対比させる。基質としてp-nitrophenyl4-guanidinobenzoate(NPGB)を用いた。HSAはNPGBに対して複数の活性部位を持っており、pkaが約6と10の触媒活性基が関与していることが分かった。次ぎに基質としてamino acid p-nitrophenyl esters(ANPE)を用いた。ANPEの中では、N-CBZ-alanine p-nitrophenyl esterに対する活性が最も強く、活性部位は一箇所(R-site,Tyr-411の近傍)であった。さらに基質(S)としてnitrophenyl phosphinate類を用い、HSAとの反応性の解明及び反応活性部位の探索を行った。

  • 研究成果

    (4件)

すべて その他

すべて 文献書誌 (4件)

  • [文献書誌] Y.Kurono et al.: "Esterase-Like Activity of Human Serum Albumin.VII.Reaction with p-Nitrophenyl 4-Guanidinobenzoate." Chemical and Pharmaceutical Bulletin. 39. 1292-1294 (1991)

    • 説明
      「研究成果報告書概要(和文)」より
  • [文献書誌] Y.Kurono et al.: "Esterase-Like Activity of Human Serum Albumin.VIII.Reaction with Amino Acid p-Nitrophenyl Esters." Chemical and Pharmaceutical Bulletin. 40. 2169-2172 (1992)

    • 説明
      「研究成果報告書概要(和文)」より
  • [文献書誌] 黒野 幸久ら: "カンプトテシン誘導体とヒト血漿タンパクとの相互作用" 薬学雑誌. 113. 167-175 (1993)

    • 説明
      「研究成果報告書概要(和文)」より
  • [文献書誌] Y.Kurono and K.Ikeda: "Esterase-Like Activity and Drug Binding of Human Serum Albumin in“The Bioorganic Chemistry of Enzymatic Catalysis:An Homage to Myron L.Bender"" CRC Press Inc.,Florida,U.S.A.Editors;J.Feder and V.T.D′Souza, 11 (1992)

    • 説明
      「研究成果報告書概要(和文)」より

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公開日: 1994-03-24  

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