| 研究概要 |
ヒト胎盤シアリダ-ゼの活性発現に重要な係わりを持つと考えられる分子量46K蛋白について、そのcDNAクロ-ニング及び構造解析を行った。ヒト胎盤cDNAライブラリ-(λgt11)より、抗46K蛋白抗体及び46K蛋白のペプチド断片のアミノ酸配列を指標に合成したオリゴヌクレオチドをプロ-ブとしてcDNAライブラリ-のスクリ-ニングを行なった。その結果,得られたcDNAの塩基配列から46K蛋白は358個のアミノ酸から成ること,さらにN末端側に17個のシグナルペプチドを持つことがわかった。しかしながら、ホモロジ-リサ-チにより,このアミノ酸配列はヒト及び酵母のαーガラクトシダ-ゼに対し高いホモロジ-を持つことがわかり、さらに検討した結果,46K蛋白は事実上αーガラクトシダ-ゼBとも呼ばれているαーNーアセチルガラクトサミニダ-ゼであることが明らかとなった(Biochem.Biophys.Res.Commun.,163,1498(1989))次に、このαーNーアセチルガラクトサミニダ-ゼのcDNAをCOS細胞にトランスフェクトさせたところ,αーNーアセチルガラクトサミニダ-ゼ活性の発現が確認され,46K蛋白がαーNーアセチルガラクトサミニダ-ゼであることを実証した。(Biohem.Biophys.Res.Commun.,170,231(1990))
一方,シアリダ-ゼの活性化機構について検討を行った。各種プロテア-ゼインヒビタ-による活性への影響を調らべたところ、アミノペプチダ-ゼA及びロイシンアミノペプチダ-ゼの阻害剤として知られるアマスタチンが特異的に阻害することを見出した。用いたシアリダ-ゼの部分精製標品にはアミノペプチダ-ゼ活性が存在しており、この活性はアマスタチンにより阻害された。これらの結果は、シアリダ-ゼの活性化がプロテア-ゼの機能と何等かの係わりを持つことを示すものであり、その詳細をさらに検討している。
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