| 研究概要 |
ヒト胎盤シアリダ-ゼの活性発現に重要な係わりを持つと考えられる分子量46KDa蛋白について、そのcDNAクロ-ニング及び構造解析を行った。ヒト胎盤cDNAライブラリ-(λgtll)より、抗46KDa蛋白抗体及び46KDa蛋白のペプチド断片のアミノ酸配列を指標に合成したオリゴヌクレオチドをプロ-ブとしてcDNAライブラリ-のスクリ-ニングをった。得られた全長cDNAは358個のアミノ酸をコ-ドし、N末端側に17個のシグナルペプチドを持つことがわかった。しかしながら、ホモロジ-リサ-チによりこのアミノ酸配列はヒト及び酵母αーガラクトシダ-ゼに対し高い相同性を持つことがわかり、更に検討した結果、 46K蛋白はαーガラクトシダ-ゼBとも呼ばれているαーNーアセチルガラクトサミニダ-ゼであることを明らかにした(Biochem,Biophys,Res,Commun.,163,1498(1989))。次に、この46KDa蛋白のcDNAをCOS細胞にトランスフェクトさせたところ、αーNーアセチルガラクトサミニダ-ゼ活性の発現が確認され、46K蛋白がαーNーアセチルガラクトサミニダ-ゼであることを実証した(Biochem,Biophys,Rec,Commun.,170,231(1990) Nucleic Acids Res.,19,2518(1991))。
一方、シアリダ-ゼの活性化機構について検討を行ったところ、シアリダ-ゼの活性化がプロテア-ゼの一種アマスタチンによって特異的に阻害されることを見いだした。用いたシアリダ-ゼの部分精製標品にはアミノペプチダ-ゼ活性が存在し,これはアマスタチンにより阻害された。これらの結果は、シアリダ-ゼの活性化がプロテア-ゼの機能と何らかの係わりを示すものであるが、現在その詳細について更に検討を行っている。
さらにまた、最近カナダのグル-プによりヒト胎盤シアリダ-ゼとして60KDa蛋白の存在が示され、更に糖脂質代謝に関与する活性化因子との係わりを示唆する報告がなされたことから、この点について検討を行った。その結果、60KDa蛋白はシアリダ-ゼではなく、イムノグロブリンGであることを明らかにし、彼らの誤りを指摘した(Biochem,Biophys,Res,Commun.,177,1211(1991))。
|
