| 研究概要 |
C9は膜上に形成されたC5bー8に結合後,立体構造が大きく変化し,膜上での高分子ポリマ-を形成し機能を発現する.我々は,C5bー8への結合を阻害することにより,C9の溶血活性を阻害する抗C9抗体(P40,X197)を得ている.本研究では,C9の構造と活性発現との関係を明らかにすることを目的とし,これらの抗体の認識するエピト-プの検索を行った.精製ヒトC9を種々の方法でフラグメントに断片化し,SDSゲル電気泳動後,ニトロセルロ-ス膜に転写した.各モノクロ-ナル抗体と反応させた後, ^<125>Iで素識した抗マウスIgGを反応させ各モノクロ-ナル抗体が認識するフラグメントをオ-トラジオグラフィ-で検出した.これらの実験から以下の結果が得られた.1.P40,X197はともにαースロンビン分解で得られるC9bを認識した.2.P40,X197はともにトリブシン分解で得られるC9b'を認識した.3.C9bをBNP Sーskatole分解して得られる2つのフラグメントのうちP40はC9bNを,X197は両者を認識した.4.C9の1次構造上の385ー408の配列の合成ペチプドは両抗体と反応しなかった.このペプチドをウサギに免疫して得られた抗体は,C9の溶血活性を阻害しなかった.これらの結果から,P40の認識するエピト-プは3つの方法によるエピト-プマッピングで共通の認識部位,392ー437の配列に存在することがわかった.X197はP40に近接した部位を認識しているが,さらにC末側をも認識している可能性が高い.本研究で明らかになった,P40,X197の認識部位はC末に近いドメイン5に存在しており,この部位がC9のC5bー8への結合に重要であると考えられる.
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