HDLーアポAI及びそのイソ蛋白の生体内代謝回転様式と臓器内mRNAレベルの研究

1990 年度 実績報告書

• 研究課題/領域番号: 02671114
• 研究機関: 福岡大学
• 研究代表者: 朔 啓二郎 福岡大学, 医学部・第二内科, 講師 (40183371)
• 研究分担者: 山本 匡介 佐賀医科大学, 医学部・内科, 講師 (00117285)
• キーワード: 高比重リポ蛋白 / アポリポ蛋白AI / 代謝回転実験 / メッセンジャ-RNA / 家兎

研究概要

HDLの主要な構成蛋白アポAIは血中HDLレベルのみならず組織のコレステロ-ル貯臓を規制する役割をになう。我々は以前よりHDLーアポAIの生体内代謝回転実験を家兎で行っている。アポAIの合成増大によるHDLの増加はコレステロ-ル逆転送系の増大と一致するという大前提のもとで、種々の条件下におけるアポAIのカイネティクスを考察している。【実験1】正常食で飼育した家兎のアポAIのfractional catabolic rate(FCR)は0.502±0.060/dayで合成率(SR)は18.14±3.75mg/kg/dayだった。【実験2】0.5%コレステロ-ル負荷食下(2ケ月間)のアポAIのFCR:0.604±0.067/day,SR:19.57±3.37mg/kg/dayでコレステロ-ル負荷により有意にFCRは増大し、アポAIの合成率は増加した。【実験3】血清HDLが欠損している遺伝的高脂血症(WHHL)ウサギ(ホモ接合体)のアポAIFCR:0.874±0.052/day,SR:8.67±0.59mg/kg/dayとFCRの増大とSRの低下がみられた。【実験4】抗脂血剤であるプロブコ-ル(1%濃度)を普通食に負荷してみるとFCR:0.534±0.041/day,SR:15.33±1.62mg/kg/dayと、ややSRの低下は認められたが、FCRとともに有意な変化ではなかった。0.5%コレステロ-ル負荷した条件下で1%プロブコ-ルを負荷(2ケ月間)するとFCR:0.928±0.109/day,SR:9.97±1.51mg/kg/dayとFCRの増大、SRの著明な低下をみとめた。【実験5】以上の実験終了後、それぞれのグル-プの家兎の肝、及び小腸をとりだし、アポAIのmRNAレベルをヒトアポAIcDNAプロ-ベを用いたNorthernブロット法にて、確認した。WHHL家兎においては小腸でのアポAImRNAレベルの著明減少を、またコレステロ-ル負荷食下ではmRNAレベルやや増大をみとめ代謝回転実験から求められたデ-タとほぼ一致した。【実験6及び今後の実験の進め方】ウサギアポAIをイモビラインドライプレ-ト(pH4ー6)で名イソ蛋白に分離、精製しヨ-ド標識後coldのHDLとインキュベ-トし、家兎体内に注入したが、アポAI_4のFCRは有意にアポAI_5のFCRより小さくアポAIイソ蛋白それぞれでの動態が異なることが判明した。さらに種々の条件下でのイソ蛋白の動きと遺伝子レベルとを対比させる方向にもっていき、HDL増減の機序を分子レベルで明らかにしたい。

研究成果

• [文献書誌] Saku,K.,Yamamoto,K.,et al: "Kinetics of HDLーapoAーI in the WHHL rabbit,an animal model of familial hypercholesterolemia." Atherosclerosis. 79. 225-230 (1989)
• [文献書誌] Saku,K.,Fujuno,M.,Yamamot,K.,et al: "Cardiac function of WHHL rabbit,an animal model of familial hypercholesterolemia." Artery. 17. 271-280 (1990)
• [文献書誌] Saku,K.,Harada,R.,Yamamoto,K.,et al: "Apolipoprotein AI mRNA levels in WHHL rabbits." Atherosclerosis. 84. 73-74 (1990)
• [文献書誌] Ying,H.,Saku,K.,et al: "Putative mechanisms of action of probucol on high density lipoprotein apolipoprotein AーI and its isoproteins kinetics in rabbits." Biochimica et Biophysica Acta. 1047. 247-254 (1990)
• [文献書誌] Saku,K.,et al: "In vivo conversion of recombinant human proapolipoprotein AI (rhーMetーProapo AI) to apolipoprotein AI in rabbits" J.Clinical Investigation.