| 研究概要 |
ヒト結腸癌由来細胞株LS180細胞を免疫原として、単クロ-ン抗体MLS128を調製した。MLS128は、LS180細胞より調製したムチン型糖ペプチドや羊顎下腺ムチン(OSM)と反応した。この反応性はシアリダ-ゼ処理によっても変化しなかった。また、Tn赤血球を凝集すること、GalNAcにより反応の阻害が見られることから,Tn抗原を認識することが推定された。更に,抗Tn抗体とされているNCCーLuー35,CA3239と比較検討した結果、抗Tn抗体であることが明らかとなった。Tn抗原は、従来GalNAcーSer/TRrとされてきたが、OSMを用いて、詳細に検討した。アシアロOSMを種々のプロテア-ゼ処理した後、MLS128immunoaffinity colunnを用いて素通り画分及び溶出画分に分け、それぞれをHPLCで分離精製した。先ず、トリプシン処理によって得られた種々の糖ペプチド(素通り画分GP1〜5、溶出画分GPI)の反応性及び構造について検討した。OSMを固相化したプレ-トに種々の濃度の糖ペプチドの存在下でMLS128の反応性を比較した。GPーIはGP1〜5に比して30〜60倍の阻害能を持つことがわかった。また、それぞれの糖ペプチドを直接固相化し、反応性を比較することによっても、GPーIが著しく反応性が高いことが確認された。更に、サ-モリシン処理物より、抗体カラムに結合する糖ペプチドGPーIIを得た。GPーIIの構造を解析した結果、LeuーSer^*ーGluーSer^*ーTRr^*ーTRr^*ーGlnーLeuーProーGly(*は糖鎖結合部位を示す。)であった。この様な構造はTn赤血球のグリコホリンAにも存在し、Tn抗原に共通の構造と考えられる。現在、Ser^*ーTRr^*ーTRr^*の特異な構造の生合成機序、すなわち、特異なGalNAc転移酵素が存在するか否かについて検討中である。
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