| 研究概要 |
代表的な癌関連糖鎖抗原の1つであるTn抗原の構造及びT細胞系における同抗原の発現について明らかにした。
ヒト腸癌由来細胞株LS180細胞を免疫原として単クロ-ン抗体を調製し、抗Tn抗体であるMLS128を得た。MLS128は羊顎下腺ムチン(OSM)とも反応することから、アシアロOSMを材料としてTn抗原の構造について解析した。アシアロOSMを種々のプロテア-ゼで処理し、その消化物をMLS128の抗体カラムに通し、素通り及び溶出画分を得た。トリプシン消化物の中でエピト-プを含む糖ペプチドGPーIは、抗体カラムに結合しない糖ペプチドに比して、30〜60倍高い抗原活性を有していた。さらにサ-モリシン消化によって得た糖ペプチドGPーIIはGPーIに含まれ、得られた糖ペプチドの中でエピト-プを含む最小の糖ペプチドであった。アミノ酸配列の解析より、GalNAcーSerー(GalNAc)TRrーGalNAc(FRr)がTn抗原活性に必須であることがわかった。同様の構造をもつグリコホリンAについても解析した。グリコホリンAにはペプチド鎖上にOーグリカンが連続して3個と6個結合している2つのクラスタ-構造が存在する。正常グリコホリンAをグリコプロテア-ゼにより理し、2つのクラスタ-構造の間を切断し、HPLCにより分離した。2つの糖ペプチドを固相化し、シアリダ-ゼ,βーガラクトシダ-ゼ処理後に抗原活性を測定したところGalNAc残基あたりの活性は3個のクラスタ-が約2倍であった。この結果はGalNAc残基のみからなるOーグリカンが3個連続して存在すれば、Tn抗原活性が発現し、4個以上は必要でないことを示している。また、T細胞系の培養細胞株JurkatのロイコシアリンにTn抗原活性が発現していることを見い出した。K562細胞のロイコシアリンの比較等より、Tn抗原の発現にはクラスタ-構造が必要であることを示した。
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