Recombinant cytokinesによる末梢血液幹細胞の増殖とその臨床応用研究

1990 年度 実績報告書

• 研究課題/領域番号: 02807231
• 研究機関: 徳島大学
• 研究代表者: 高上 洋一 徳島大学, 医学部・附属病院, 助手 (90197046)
• キーワード: 造血幹細胞 / サイトカイン / 造血コロニ-刺激因子

研究概要

末梢血幹細胞収量は.長期に強力な化学療法を受けた者では低下するこのような患者に、アフェレ-シス施行前にrecombinant GーCSFを7日間投与した場合には、幹細胞収量は著明に増加した。次にこのようにして採取した幹細胞を、実際に患者に輸注した場合には、その細胞数に応じて移植後の白血球や血小板数の回復が促進された。続いて患者体外で幹細胞の培養を行い、採取した細胞を更に増殖させる初期研究として、適正な末梢血幹細胞培養法を検討した。まずメチルセルロ-ス培地法とlimiting dilution assay法を用い、各種サイトカイン存在下における幹細胞の増殖パタ-ンを検討した。その結果、末梢血幹細胞の増殖動態は骨髄細胞と異なり、GーCSFやGMーCSFには反応し難く、その培養にはPHA刺激リンパ球培養上清を用いる必要があることが判明した。また従来造血抑制効果を有すとされたインタ-フェロンーγ(IFN)が、末梢血幹細胞のような未熟幹細胞に対しては増殖刺激作用を有することも示した。このため遺伝子合成サイトカインをコロニ-刺激因子源として用いる場合には、ILー3単独あるいはILー3とIFNを併用することが重要と思われた。これらの知見に基づき.5%CO_2、5%O_2、90%N_2下で、患者から採取した幹細胞の一部を用いてILー3あるいはILー6と共に増殖させる試みを行ったが、我々の使用した条件では幹細胞の減少が著しく、目的は果せなかった。
以上より、今後は末梢血幹細胞増量のための培養条件を改良する必要が急務となる。37℃の温度条件では、幹細胞に対する障害が増加することも考えられるため、今後は適性な温度条件の検討も必要となる。

研究成果

• [文献書誌] Takaue Y,Kawano Y,Reading CL,Watanabe T,Ninomiya T,et al.: "Effects of recombinant human GーCSF,GMーCSF and ILー3 on the growth of purified human peripheral blood progenitors" Blood. 76. 330-335 (1990)
• [文献書誌] Takaue Y,Watanabe T,Kawano Y.: "A simplified and rapid limiting dilution assay of T lymphocytes." Cellular lmmunology.
• [文献書誌] Takaue Y,Watanabe T,Hoshi Y,Abe T.: "Effectiveness of highーdose MCNU therapy and hematopoietic stem cell autografts treatment of childhood acute leukemia/lymphoma with highーrisk features." Cancer.
• [文献書誌] Takaue Y.: "Peripheral blood stem cell autografts in children with acute lymphoblastic leukemia and lymphoma: Updated experience." Leukemia and Lymphoma.
• [文献書誌] Kawano Y,Takaue Y,Minakuchi J,Abe T,: "Impaired production of burst promoting activity by blood mononuclear cells from chronic uremic patients." American Journal of Hematology.
• [文献書誌] Watanabe T,Takaue Y,Abe T,Hirao A et al.: "Early infectious complications after peripheral blood stem cell autografts in children." Medical and Pediatric Oncology.
• [文献書誌] Kawano Y,Takaue Y,Abe T,Watanabe T,et al.: "Synergistic effect of human recombinant interferonーgamma and interleukinー3 on the growth of immature hematopoietic blood progenitors." Blood.