先天性免疫不全症成立におけるIg遺伝子プロモ-タ-結合蛋白の意義に関する研究

1990 年度 実績報告書

• 研究課題/領域番号: 02807235
• 研究機関: 国立小児病院
• 研究代表者: 水谷 修紀 国立小児病院, 小児医療研究センター・ウィルス研究室, 室長 (60126175)
• キーワード: OCT2 / in vitro trans lation / RTーPCR

研究概要

Ig遺伝子プロモ-タ-に結合するOCT2たん白をコ-ドする遺伝子pucC_1は免疫グロブリン産生を促すことが知られており,それ故免疫グロブリン産生の障害を示す免疫不全症の成立に何らかの役割を演じていると考えられる。そこで我々はOCT2たん白に対する抗体を作製することを目的にOCT2遺伝子を発現ベクタ-に挿入し,in vitroでたん白を翻訳させることを考えた。IgGFc部分との融合たん白として本たん白を回収すべくPRIT2Tベクタ-にOCT2遺伝子をin frameに結合させ(そのためまずBluescriptベクタ-に本遺伝子を結合させ,その後再びそれを切り出しrestriction siteを変化させPRIT2Tベクタ-に結合させた。),大腸菌にとりこませたのち,IgGセファデックスカラムでたん白の回収に努めた。併し本たん白がDNA結合たん白であるせいかOCT2たん白の回収はできなかった。そこで作戦を変更し、本遺伝子をpGeーmini1ベクタ-に結合し,T7プロモ-タによってin vitroでmRNAを合成させることにした。その結果予想されるサイズよりやや小さめであるがエチジンブロマイド染色によって認められる程度のmRNAを得ることができた。現在更にRabbit Reticulocyte Lysateの系を利用してin vitro translationの実験に移っている。更にReverse Transcriptaseを用いたRTーPCR法によってOCT2mRNAの発現あるいはその変異の発見等にもアプロ-チしていく予定でいる。

研究成果

• [文献書誌] M Ozaki,S.Mizutani,et al.: "Molecular aualysis of 5'JH region of immunoglobulin heavy chain gene in human acute leukemia." Leukemia. 4. 415-418 (1990)
• [文献書誌] K.Nakamura,S.Mizutani et al.: "Molecular diversity of precurser B acute lymphoblastic leukemias identified by the immunoglobulin heavy chain gene organization" Leukemia. 4. 106-110 (1990)
• [文献書誌] K.Miyamura,S.Mizutani,et al.: "Prediction of clinical relapse after bone marrow transーplantation by PCR for Ph positive acate lymphoblastic lcukemia." The Lancet. II. 890 (1990)
• [文献書誌] H.Tsuchiya,S.Mizutani,et al.: "Response to GーCSF and GMーCSF in Phーpositive ALL with myeloid surface markers" Blood. 77(2). 411-413 (1991)
• [文献書誌] K.Nakamura,S.Mizutani,et al.: "Molecular analysis of chronic myelogenous leukemia using the Polymerase chain Reaction." Cancer.
• [文献書誌] K.Nakamura,S.Mizutani,et al.: "Molecular analysis of BCR/ABL products in a case of myelodys plastic syndrome with late appearing Flicliromosome." Br.J.Haematol.
• [文献書誌] 水谷 修紀: "新小児医学大系 年刊版" 中山書店, 8 (1990)