イヌジステンパーウイルス(CDV)の膜タンパクの一つであるMタンパクの機能解析を行うことを目的として以下の実験を行った。 1)CDVのMタンパクをほ乳類細胞に一過性、あるいは持続的に発現させたときのMタンパクの局在や、宿主細胞タンパクとの相互作用、宿主遺伝子発現への影響を検索するために、Mタンパクを発現ベクターに組み込み、ほ乳類細胞での発現を試みた。具体的には一過性大量発現のためにpCAGGSベクターを用いた。また、Cre/locPシステムにより発現をコントロールできるよう、neo耐性遺伝子をもつpCALNLベクターにM遺伝子を組み込み、293細胞へ導入し、薬剤耐性細胞を選出した。さらに、恒常的にM遺伝子を発現する細胞を得るために、同様にneo耐性遺伝子をもつpcDNAベクターにM遺伝子を組み込み、293細胞へ導入し、薬剤耐性細胞の選出を試みたが、Mタンパクを恒常的に発現する細胞を得ることはできなかった。今後はMタンパクの一過性発現によりMタンパクの機能解析を行っていく。 2)Mタンパク単独ではなく、ウイルスの増殖環におけるMタンパクの機能解析のためにMタンパクを欠失した組換えCDVの作出のために、M遺伝子を欠失したCDV全ゲノムを作製し、リバースジェネティクスによりMタンパク欠損CDVの作出を試みた。具体的にはMタンパクを欠損したウイルスは通常とくらべて増殖やCPE形成能が劣ることが予想されるため、リバースジェネティクスによりウイルスのレスキューが成功していることを示すマーカーとして、M遺伝子ORFをEGFP遺伝子ORFと入れ替えたCDVゲノムを構築した。 さらに、レスキューの際にMタンパクを供給する目的で1)のMタンパク発現ベクターやMタンパク発現細胞を用いて実験を行っている。この組換えウイルスと親ウイルスを比較し、Mタンパクの機能解析を行っていく。
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