胸腺における自己反応性T細胞クロ-ンの選択的分化に関する研究

1991 年度 実績報告書

• 研究課題/領域番号: 03044130
• 研究機関: 東海大学
• 研究代表者: 垣生 園子 東海大学, 医学部免疫学教室, 教授 (30051618)
• 研究分担者: LOH Dennis Y ワシントン大学, 医学部・ハワードヒューズ医学研究所 ; 西村 孝司 東海大学, 医学部免疫学教室, 助教授 (30143001)
• キーワード: 自己反応性T細胞 / トランスジェニックマウス / T細胞抗原レセプタ- / クロ-ン選択機構 / 胸線ストロ-マ細胞 / 胸線内分化

研究概要

本共同研究では、自己免疫疾患の発生機序解明を主たる目的として、胸腺内分化過程で自己反応性T細胞が選択除去される現象を再現できるin vitro実験系を作製し、選択機構関連分子を明らかにする。1991年度には以下の結果を得た。
1.胸腺ストロ-マ細胞株の樹立とその分化誘導及びT細胞クロ-ン選択能:マウス胸腺より3株のストロ-マ細胞株を得、T細胞形質発現誘導能を検討した。この中、クロ-ンTNCーR3.1は1)CD4^-CD8^-(DN)未熟胸腺細胞をCD4^+CD8^+(DP)細胞へ分化誘導した。この誘導はILー7の添加により増強した。また、2)DP細胞はsuboptimaldoseILー2と共にTNCーR3.1上で培養すると、CD8^+細胞に分化した。次にTNCーR3.1とDP細胞の共培養系にス-パ-抗原(SEA及びSEB)を加えると、SEAではVβ3^+が、SEBではVβ3^+とVβ8^+細胞が抗原に特異的に減少した。これらの結果は、胸腺内未熟分化段階にある自己反応性T細胞は負の選択を受けることをin vitroの系で実証すると同時に、今後の分子レベルでの解析に有用な系であることが確証された(以上は日本で行なった)。
2.OVA特異的TCRトランスジェニックマウスの作製:異なるOVA特異的ヘルパ-T細胞クロ-ンよりTCRーα及びβ鎖遺伝子を日米双方で単離し、2鎖DNAを受精卵に注入しトランスジェニックマウスを得た。米国のマウスでは導入遺伝子の発現も確認できたので、我々の樹立した胸腺ストロ-マ細胞株を用いて解析を開始した。一方、我々の単離した遺伝子は米国側の指導のもとに受精卵に注入した。現在、遺伝子発現を検討するため子孫繁殖中である。

研究成果

• [文献書誌] Nishimura,T.,Takeuchi,Y.,Cao,X.,Urano,K.and Habu,S: "Monoclonal antibody against actin cross-reacts with Thy-1 molecule and inhibits LFA-1-dependent cell-cell interaction of T cells." J.Immunol.147. 2094-2099 (1991)
• [文献書誌] Nishimura,T.,Togashi,Y.,Wakamiya,N.,Hashimoto,Y.,Yagita,H.,Okumura,K.,and Habu,S.: "T cell receptor-independent cell-mediated cytotoxicity by nude mouse lymphokine-activated killer cells." Jpn.J.Cancer Res.82. 448-455 (1991)
• [文献書誌] Watanabe,K.,Tanaka,R.,Nishimura,T.,Kumagai,Y.,Miyazaki,J.,Yamamura,K.,and habu,S.: "I-E-restrited monoclonal expansion of B lymphocytes in the thymus of NOD mouse." Int.Immunol.3. 839-842 (1991)
• [文献書誌] Yoshida,T.,Norihisa,Y.,Habu,S.,Kobayashi,N.,Takei,M.,Kanehira,N.and Shimamura,T.: "Proliferation of natural suppressor cells in long-term cultures of spleen cells from normal adult mice." J.Immunol.147. 4136-4139 (1991)
• [文献書誌] Nishimura,T.,Nakamura,Y.,Takeuchi,Y.,Tokuda,Y.,Iwasawa,M.,Kawasaki,A.,Okumura,K.and Habu,S.: "Generation,propagation and targeting of human CD4^+ helper/killer T cells induced by anti-CD3 monoclonal antibody plus recombinant interleukin 2:an efficient strateagy for adoptive tumor immunotherapy" 148. 285-291 (1992)
• [文献書誌] Nishimura,T.,Nakamura,Y.,Takeuchi,Y.,Gao,X.,Tokuda,Y.Okumura,K.and Habu,S.: "Bispecific antibody-directed antitumor activity of human CD4^+ helper/killer T cells induced by anti-CD3 monoclonal antibody plus interleukin 2." Jpn.J.Cancer Res.82. 1207-1210 (1991)
• [文献書誌] Nishimura,T.,Nakamura,Y.,Tsukamoto,H.,Takeuchi,Y.,Tokuda,Y.,Iwasawa,M.,Yamamoto,T.,Masuko,T.,Hashimoto,Y.and Habu,S.: "Human c-erbB-2 protooncogene product as a target for bispecific antibody-directed adoptive tumor immunotherapy." Int.J.Cancer. 51. 1-5 (1991)
• [文献書誌] Hibi,T.,Fujisawa,T.,Kanai,T.,Akatruka,A.,Habu,S.,Handa,H.and Tsuchiya,M.: "Establishment of epithelial cell lines from human and mouse thymus immortalized by the 12S adenoviral Ela gene product." Thymus. 18. 155-167 (1991)