1991 年度実績報告書

オンコジ-ンタンパク質との融合化によるホメオドメインタンパク質の標的遺伝子の探索

研究課題

研究課題/領域番号	03152009
研究機関	東北大学
研究代表者	黒岩厚東北大学, 抗酸菌病研究所, 助教授 (20134611)
研究分担者	佐々木洋東北大学, 抗酸菌病研究所, 助手 (10211939)
キーワード	ホメオボックス遺伝子 / ホメオドメインタンパク質 / 転写因子 / オンコジ-ン / 標的遺伝子 / 形態形成
研究概要	我々は、ニワトリのホメオボックス遺伝子の中で、Choxー1クラスタ-のデフォルムドタイプのホメオドメインを持つChoxー1.4遺伝子の標的遺伝子の探索を行っている。人工的なモデル標的配列を用いた実験では、Choxー1.4タンパク質はこの配列には結合するが、転写の活性化を引き起こさない事がわかっている。目的は、人為的にこのタンパク質を転写活性化因子に転換し、細胞に導入した時新たに誘導される転写産物の分離同定により標的遺伝子の同定を行うものである。Choxー1.4タンパク質のDNA結合活性を担うホメオドメインの上流部分をcーJun,cーmycの転写活性化ドメインに置換、あるいはホメオドメインの下流にVP16の転写活性化ドメインの導入し遺伝子の改変を行った。ニワトリ肝臓由来の株細胞LMHにおいては、いづれもが強い転写の活性化因子として機能する事がわかった。改変を行ったホメオドメインタンパク質は、転写活性化因子として機能し得る事がわかった。しかし一次培養系のニワトリ胚繊維芽細胞では、導入遺伝子からのタンパク質は産生されるもののどれも転写の活性化は引き起こさなかった。胚繊維芽細胞では、他のホメオドメインの転写活性化ドメインをChoxー1.4タンパク質と融合させる事により転写促進因子へと転換できた。東大医科研の伊庭氏との共同研究で、胚繊維芽細胞にウィルスベクタ-を用いChoxー1.4そのものを導入した。この場合トランスフォ-ムは起こさないが、明らかにChoxー1.4を持たないウィルスを感染させた時にはみられないような形態の変化が誘起された。人工的な標的配列を用いた場合には観察されないような作用が、胚繊維芽細胞に引き起こされたものと考えられる。今後は、改変した遺伝子を胚繊維芽細胞に安定に組み込んだり、ウィルスを用いて遺伝子を導入し、対照群とのディファレンシャルスクリ-ニンにより標的遺伝子の分離を試みる。

研究成果
(5件)

すべてその他

すべて文献書誌 (5件)

[文献書誌] Hiroshi Sasaki,Masakazu Yamamoto and Atsushi Kuroiwa: "Cell type dependent transcription regulation by chick homeodomain proteins" Mechanism of Development. (1992)
[文献書誌] Yuji Yokouchi,Hiroshi Sasaki and Atsushi Kuroiwa: "Homeobox gene expression correlated with the bifurcation process of limb caotilage development" Nature. 353. 443-445 (1991)
[文献書誌] Yuji Yokouchi,Kojune Osugi,Hiroshi Sasaki and Atsushi kuroiwa: "Chicken homeobox gene Msx-1:Structure,expression in limb buds and effect of retinoic acid." Development. 113. 431-444 (1991)
[文献書誌] Tsutomu Nohno,Sumihare Noji,Eiki Koyama,Kazuhiko Ohyama,Fumio Myokai,Atsushi Kuroiwa,Taichi Sato and Shigehiko Taniguchi: "Involvement of the Chox-4 chicken homeobox genes in detemination of anteroposterior axial polarity during limb development" Cell. 64. 1197-1205 (1991)
[文献書誌] Benoit Robort,Gary Lyons,B.kay Slmandl,Atsushi Kuroiwa and Masgaret Buckingham: "The apical ectodermal ridge regulates Hox-7 and Hox-8 gene expression in developing chick limb buds" Oenes and Development. 5. 2363-2374 (1991)

1991 年度 実績報告書

オンコジ-ンタンパク質との融合化によるホメオドメインタンパク質の標的遺伝子の探索

研究代表者

黒岩 厚 東北大学, 抗酸菌病研究所, 助教授 (20134611)

研究成果

[文献書誌] Hiroshi Sasaki,Masakazu Yamamoto and Atsushi Kuroiwa: "Cell type dependent transcription regulation by chick homeodomain proteins" Mechanism of Development. (1992)

[文献書誌] Yuji Yokouchi,Hiroshi Sasaki and Atsushi Kuroiwa: "Homeobox gene expression correlated with the bifurcation process of limb caotilage development" Nature. 353. 443-445 (1991)

[文献書誌] Yuji Yokouchi,Kojune Osugi,Hiroshi Sasaki and Atsushi kuroiwa: "Chicken homeobox gene Msx-1:Structure,expression in limb buds and effect of retinoic acid." Development. 113. 431-444 (1991)

[文献書誌] Tsutomu Nohno,Sumihare Noji,Eiki Koyama,Kazuhiko Ohyama,Fumio Myokai,Atsushi Kuroiwa,Taichi Sato and Shigehiko Taniguchi: "Involvement of the Chox-4 chicken homeobox genes in detemination of anteroposterior axial polarity during limb development" Cell. 64. 1197-1205 (1991)

[文献書誌] Benoit Robort,Gary Lyons,B.kay Slmandl,Atsushi Kuroiwa and Masgaret Buckingham: "The apical ectodermal ridge regulates Hox-7 and Hox-8 gene expression in developing chick limb buds" Oenes and Development. 5. 2363-2374 (1991)

1991 年度実績報告書

黒岩厚東北大学, 抗酸菌病研究所, 助教授 (20134611)