1991 年度実績報告書

金属プロテア-ゼの構造と機能

研究課題

研究課題/領域番号	03241222
研究機関	九州大学
研究代表者	岩永貞昭九州大学, 理学部, 教授 (90029942)
研究分担者	川畑俊一郎九州大学, 理学部, 助手 (90183037)
キーワード	金属プロテア-ゼ / クサリヘビ毒 / X因子 / C型レクチン / 血小板凝集阻止因子 / Znキレ-ト部位 / セレクチン / デスインテグリン
研究概要	クサリヘビRussell's viper毒より、血液凝固X因子及びIX因子を特異的に限定分解し活性型に変換する酵素のRVVーXを精製し、その全アミノ酸配列を決定した。RVVーXは二本鎖より成り、重鎖(59kDa)と軽鎖(LC1=18kDa/LC2=21kDa)がSーS結合していた。LC1は123残基のアミノ酸から成り、24位のアスパラキンには糖鎖を含んでいる。NBRFデ-タベ-スを用い相同性検索を行なった結果、意外なことに、LC1は肝臓のアシアロ糖蛋白受容体やセレクチンのいわゆるC型レクチンと相同性のあることが見い出された。LC1は半シスチンを7残基持つが、SーS結合が既に決定されているフジツボレクチンとの相同性よりCys4ーCys15、Cys32ーCys121、Cys98ーCys113の3組がSーS結合し、また、LC1に特異的なCys77は重鎖とのSーS結合に関与すると推定した。一方、重鎖はハブ毒の高分量出血因子HR1B(415残基)と酷似していた。すなわち、重鎖はN末端半分の領域に金属プロテア-ゼドメインを含み、亜鉛を配位するリガンドのHis145、His149及び活性残基の一部と考えられているGlu146も保存されていた。一方、C末側には強力な血小板凝集阻止因子であるdisintegrin様の構造ドメインを含んだ。したがって、RVVーXは、軽鎖にC型レクチン様ドメインを、重鎖に金属プロテア-ゼとdisintegrin様ドメインを含む新しいプロテア-ゼであることが明らかとなった。今後は蛇毒の金属プロテア-ゼの高次構造(目下、阪大タンパク研との共同研究でこの種のプロテア-ゼの結晶回析を進めている)をもとに、Zn^<2+>の配位した触媒基の同定及び反応機構、特異性に関連した構造要素などを明らかにしたい。

研究成果
(8件)

すべてその他

すべて文献書誌 (8件)

[文献書誌] Sueyoshi,T.,et al.: "Cysteine Proteinase Inhibitor in the Ascitiソ Fluid of Sarcoma 180 Tumorーbearing Mice is a LowーMolecularーWeight Kininogen:Partial COOHーterminal Sequence and Susceptibility to Various Glandular Kallikreins." J.Biol.Chem.265. 10030-10035 (1990)
[文献書誌] Iwanaga,S.,et al.: "A New Trisaccharide Sugar chain Linked to a Serine Residue in the First EGFーlike Domain of Clotting Factors VII and IX and Protein Z." Adv.Exp.Med.Biol.281. 121-131 (1990)
[文献書誌] Takeya,H.,et al.: "The Complet Amino Acid Sequence of the High Molecular Mass Hemorrhagic Protein,HR1B,Isolated from the Venom of Trimeresurus flavoviridis." J.Biol.Chem.265. 16068-16073 (1990)
[文献書誌] Morita,T.,et al.: "γーCarboxyglutamic Acid (Gla)ーDomainless Blood Coagulation Factor IXa Species:Preparation and Properties." J.Biochem.110. 990-996 (1991)
[文献書誌] Miyata,T.,et al.: "Factor IX Amagaski:A New Mutation in the Catalytic Domain Resulting in the Loss of both Coagulant and Esterase Activities." Biochemistry. 30. 11286-11291 (1991)
[文献書誌] Muta,T.,et al.: "Limulus Clotting Factor(Factor C):A Novel Protease tha has a Mosaic Structure with Complementーlike and Lectinーlike Domains." J.Biol.Chem.266. 6554-6561 (1991)
[文献書誌] 岩永貞昭: "第6回ビタミンK機能セミナ-(総説)" メディカルヴュ-社, 17 (1991)
[文献書誌] Miyat,T.and Iwanaga,S.(ed.by Kenzo Tanaka): "Recent Advances in Thrombosis and Fibrinolysis" Academic Press,Inc.,New York, 13 (1991)

1991 年度 実績報告書

金属プロテア-ゼの構造と機能

研究代表者

岩永 貞昭 九州大学, 理学部, 教授 (90029942)

研究成果

[文献書誌] Sueyoshi,T.,et al.: "Cysteine Proteinase Inhibitor in the Ascitiソ Fluid of Sarcoma 180 Tumorーbearing Mice is a LowーMolecularーWeight Kininogen:Partial COOHーterminal Sequence and Susceptibility to Various Glandular Kallikreins." J.Biol.Chem.265. 10030-10035 (1990)

[文献書誌] Iwanaga,S.,et al.: "A New Trisaccharide Sugar chain Linked to a Serine Residue in the First EGFーlike Domain of Clotting Factors VII and IX and Protein Z." Adv.Exp.Med.Biol.281. 121-131 (1990)

[文献書誌] Takeya,H.,et al.: "The Complet Amino Acid Sequence of the High Molecular Mass Hemorrhagic Protein,HR1B,Isolated from the Venom of Trimeresurus flavoviridis." J.Biol.Chem.265. 16068-16073 (1990)

[文献書誌] Morita,T.,et al.: "γーCarboxyglutamic Acid (Gla)ーDomainless Blood Coagulation Factor IXa Species:Preparation and Properties." J.Biochem.110. 990-996 (1991)

[文献書誌] Miyata,T.,et al.: "Factor IX Amagaski:A New Mutation in the Catalytic Domain Resulting in the Loss of both Coagulant and Esterase Activities." Biochemistry. 30. 11286-11291 (1991)

[文献書誌] Muta,T.,et al.: "Limulus Clotting Factor(Factor C):A Novel Protease tha has a Mosaic Structure with Complementーlike and Lectinーlike Domains." J.Biol.Chem.266. 6554-6561 (1991)

[文献書誌] 岩永 貞昭: "第6回ビタミンK機能セミナ-(総説)" メディカルヴュ-社, 17 (1991)

[文献書誌] Miyat,T.and Iwanaga,S.(ed.by Kenzo Tanaka): "Recent Advances in Thrombosis and Fibrinolysis" Academic Press,Inc.,New York, 13 (1991)

1991 年度実績報告書

岩永貞昭九州大学, 理学部, 教授 (90029942)

[文献書誌] 岩永貞昭: "第6回ビタミンK機能セミナ-(総説)" メディカルヴュ-社, 17 (1991)