ストロ-マ細胞による骨髄系前駆細胞の増殖・分化制御機構に関する研究

1991 年度 実績報告書

• 研究課題/領域番号: 03252208
• 研究機関: 大阪大学
• 研究代表者: 金倉 譲 大阪大学, 医学部, 助手 (20177489)
• 研究分担者: 金山 良男 大阪大学, 医学部, 講師 (30158852)
• キーワード: ストロ-マ細胞 / GMーCSF / ILー3 / CーKit / Stem cell factor / 増殖 / 分化 / 血液幹細胞

研究概要

ヒト急性巨核球性白血病細胞より樹立された細胞株(M07)は、GMーCSFやILー3依存性に増殖し骨髄系前駆細胞の良いモデルとなる。骨髄系前駆細胞の周囲には線維芽細胞、内皮細胞、脂肪細胞、マクロファ-ジなどのストロ-マ細胞が存在している。これらストロ-マ細胞の骨髄系前駆細胞に対する影響を解析するため、マウス線維芽細胞(Balb/3T3)とM07細胞の共生培養を行った。この共生培養によりM07細胞の増殖が促されたが、M07細胞の増殖刺激活性は線維芽細胞の培養上清中(FCM)にも検出された。このFCMによるM07細胞の増殖は、チロシンキナ-ゼ阻害剤ゼニスチンにより完全に阻害され、FCMによる増殖にはチロシンキナ-ゼの関与が示唆された。抗リン酸化チロシン抗体ならびに抗cーkit抗体を用いた解析により、FCMによるM07細胞の増殖にはcーkit蛋白のチロシンリン酸化と活性化が重要な役割を担っている事が明かとなった。FCMの代わりに線維芽細胞細胞表面に発現されているcーkitリガンド[stem cell factor(SCF)]を用いても同様の知見が得られた。これらの結果は、ある種のAML細胞の増殖にcーkitを介する機構が存在することを示唆した。そこで、AML細胞を用いてcーkitの発現を検討した。AML25例中20例(80%)にcーkitのmRNAと蛋白の発現が認められた。しかし、cーkitの発現とFAB分類あるいは病像の間に有意の相関は認められなかった。cーkit蛋白を発現している11例のAML中6例でSCFはAML細胞の増殖を促し、しかもGMーCSFとの相乗効果が認められた。また、SCF刺激前より12例中7例に軽度ではあるがcーkit蛋白のチロシンリン酸化が認められた。以上のことよりストロ-マ細胞は、GMーCSF等の造血因子ばかりでなくcーkitリガンドを介し正常造血ばかりでなく腫瘍性の骨髄性前駆細胞の増殖・分化に関与していると考えられる。

研究成果

• [文献書誌] Y.Kanakura: "Grarulocyteーmacrophage colonyーstinwlating factor and interleukinー3 induce rapid phosphorylation and activation of the protoーoncogene Rafー1 in a human factorーdependent myeloid cell line." Blood. 77. 243-248 (1991)
• [文献書誌] Y.Kanakura: "Phorbol 12ーmyristate 13ーacetate Inhibits granulocyカcーmacrophage colonyーstinwlating factorーinducrd protein tyrosine phosphorytation in a human factorーdependent cell line." J.Biol.Chem.266. 490-495 (1991)
• [文献書誌] Y.Kanakura: "Identification of functionally distinct domains of human granulocyteーmacrophage colonyーstimnlating factor using monoclonil antibodies." Blood. 77. 1033-1043 (1991)
• [文献書誌] A.Kuriu: "Proliferation of human mycloid leukemia cell line associated with the tyrosineーphosphorylation and activation of the protoーoncogene cーkit product." Blood. 78. 2834-2840 (1991)
• [文献書誌] H.Ikeda: "Expression and functional role of the protoーoncogene cーkit in acute myeloblastic leukemia cells." Blood. 78. 2962-2968 (1991)
• [文献書誌] T.Tamaki: "Surface immunoglobullnーmediated signal transduction involves rapid phosphorylation and activation of the protoーoncogene Rafー1 in human B cells." Cancer Res.52. 566-570 (1992)