| 研究概要 |
副腎白質ジストロフィ-(Adrenoleukodystrophy,以下ALD)の原因遺伝子を解明することを目的として、ヒトX染色体の一部(Xq24→qter)のみを有する雑種細胞(X3000‐11.1)からコスミドゲノムライブラリ-を作製し、 ^<32>Pでラベルしたtotal human genomic DNAをプロ-ブとしてスクリ-ニングするとこにより、1784個のコスミドクロ-ンを単離した。これらについてプラスミド抽出器を用いてコスミドDNAを調製し、NotI制限酵素による消化実験により、NotI認識部位を有するクロ-ンとして400クロ-ンを同定した。これらについて雑種細胞パネルを用いてregional mappingを行い、さらにこれらのコスミドクロ-ン間の相互のhybridizationのリ-グ戦を行った結果、Xq28領域に19個の独立したcosmid contigを作製することができた。
ALD遺伝子を同定するためには、Xq28領域において発現している遺伝子を同定していくことが必須のステップと考えられ、このために、1)Xq28領域にマップされるコスミドクロ-ンで、種間で保存性の高い配列を有しているコスミドクロ-ンを同定し、このコスミドをプロ-ブとしてcDNAを単離すること、2)ヒトX染色体の一部のみを有する雑種細胞において発現しているヒト由来のtranscriptをクロ-ニングする、という2つのアプロ-チを行っている。後者はスプライシング前のRNA(hetero‐genous nuclear RNA,以下hnRNA)がイントロン内にヒトに特異的なAlu配列を有していることを利用するもので、X3000‐11.1から調製したhnRNA、Aluプライマ-を用いてhnRNA‐complementary DNAライブラリ-を作製し、現在までにXq28由来のhncDNAクロ-ンとして6クロ-ンを同定することができた。
今後、今回単離したコスミドクロ-ンを用いて、物理地図の作製およびYACクロ-ンの単離、発現遺伝子の同定を行っていく予定である。
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