| 研究課題/領域番号 |
03404008
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| 研究機関 | 名古屋大学 |
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研究代表者 |
山下 興亜 名古屋大学, 農学部, 教授 (50023411)
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| 研究分担者 |
佐藤 行洋 名古屋大学, アイソトープ総合センター, 助手 (60222022)
池田 素子 名古屋大学, 農学部, 日本学術振興会特別研
柳沼 利信 名古屋大学, 農学部, 助手 (60135332)
小林 迪弘 名古屋大学, 農学部, 助教授 (60111837)
今井 邦雄 三重大学, 生物資源学部, 助教授 (80109313)
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| キーワード | 休眠ホルモン / 食道下神経節 / 神経ペプチド / cDNA / トレハラーゼ / 休眠 / カイコ |
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| 研究概要 |
昨年度決定した休眠ホルモンのアミノ酸配列を参考にしてオリゴヌクレオチドを化学的に合成し、これをプローブとして休眠ホルモンのcDNAを単離した。cDNAの塩基配列からアミノ酸配列を推定したところ、休眠ホルモンの19位のアミノ酸がTrpであった。そこで[ ^<19>Trp]の休眠ホルモン分子を約10万個の食道下神経節の抽出物から単離することを始めた。溶媒抽出とHPLC分離によって[^<19>Trp]休眠ホルモンを単離することに成功した。本ホルモンを化学的に合成し、その生物活性を検定したところ、天然のホルモンと同じ活性を示した。このことから[^<19>Trp]を新たな休眠ホルモン分子種と決定した。
休眠ホルモンをコードしているcDNAの全塩基配列を決定し、アミノ酸配列を推定し相同ペプチド検索をしたところ、本cDNAはフェロモン生合成活性化神経ペプチドと3種のPhe-Xxx-Pro-Arg-Leu-NH^2配列をC末端に持つペプチドをコードしていることが判明した。3種の新規なペプチドを合成し、これを参考物質として用いて、食道下神経節抽出物からの単離を試みた。その結果、少なくとも2種のペプチドが確認されたので、休眠ホルモン前駆体タンパク質は5種類の神経ペプチドホルモンがをコードしたポレプロテンであると結論した。しかし3種のペプチドの生物機能を同定するにはいたらなかった。
培養卵巣系せ用いて休眠ホルモンの作用を解析したところ、トレハラーゼ活性を特異的に上昇させることが判明した。この生活化作用にはCaイオンが必要であり、しかもトレハラーゼ遺伝子の発現を伴っていることも明らかになった。
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