研究課題/領域番号 |
03404063
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研究機関 | 大阪大学 |
研究代表者 |
田中 亀代次 大阪大学, 細胞工学センターヒト体細胞遺伝生理学部門, 教授 (80144450)
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研究分担者 |
角田 幸雄 近畿大学, 農学部蓄産学教室, 教授 (80217364)
三浦 直行 大阪大学, 細胞工学センター・ヒト体細胞遺伝生理学部門, 助手 (40165965)
金田 安史 大阪大学, 細胞工学センター・ヒト体細胞遺伝生理学部門, 助手 (10177537)
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キーワード | 色素性乾皮症 / 遺伝子診断 / 遺伝子タ-ゲティング |
研究概要 |
A群色素性乾皮症遺伝子(XPAC遺伝子)の、A群XP患者における突然変異を明らかにした。日本人患者には、1)イントロン3のスプライス受容部位におけるG→Cトランスバ-ジョンに起因するスプライス異常、2)エキソン3内のT→Aトランスバ-ジョンによるTyr^<116>(TAT)→stop(TAA)のノンセンス突然変異、3)エキソン6内のC→TトランジションによるArg^<228>(CGA)→Stop(TGA)のノンセンスが突然変異を見いだした。いずれの突然変異も新しい制限酵素部位が生じ、それぞれ、AlwNI,MseI,HphIRFLPにより診断が可能である。日本人患者には、85%、4%、13%の頻度でこれらの突然変異が認められたが、外国人A群XP患者には見い出せず、創始者効果が認められた。一方、白人、黒人等、他の人種のいずれのA群XP患者にもXPAC遺伝子の突然変異を見い出している。N端側のZnフィンガ-モチ-フの108番目のCysがPheに変異(G→Tトランスバ-ジョン)している患者や、C端側のZnフィンガ-モチ-フのHisがArgに変異(A→Gトランジション)している患者も見つかり、XPAD蛋白のDNA修復機能におけるZnフィンガ-構造の重要性が示唆された。さらに、XPの病態を解明し、DNA修復機構が個体にとってどのような役割を持ち、個体の分化、老化、がん化等にいかに関与しているかを解明するため、ES細胞の遺伝子標的導入法によるXPモデルマウスの樹立をこころみている。CappechiらのPositiveーnegative selection法に従い、replacement typeのtargeting vectorを作成した。エレクトロポレ-ションでこれをES細胞に導入し、GANCとG418抵抗性のクロ-ンを得、PCR・ゲノムサザンブロツト法で相同組換え体を選別した。これを集合法にて胚にもどし、体細胞キメラマウス(雄)を得ている。野生マウスとの交配を行い、生殖系列キメラ、ヘテロ接合体の樹立をめざしている。
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