ヒト未分化白血病細胞株から産生される新しい造血因子とその生物学的意義

1993 年度 実績報告書

• 研究課題/領域番号: 03404067
• 研究機関: 東京大学
• 研究代表者: 浅野 茂隆 東京大学, 医科学研究所, 教授 (50134614)
• 研究分担者: 東條 有伸 東京大学, 医科学研究所, 助手 (00211681) ; 池淵 研二 東京大学, 医科学研究所, 講師 (20175194) ; 谷 憲三朗 東京大学, 医科学研究所, 講師 (00183864) ; 佐藤 典治 東京大学, 医科学研究所, 助教授 (90162461) ; 小澤 敬也 東京大学, 医科学研究所, 助教授 (30137707)
• キーワード: 造血幹細胞 / 肥満細胞 / cDNAライブラリー / 精製 / ヌードマウス

研究概要

ヒト慢性骨髄性白血病急性転化症例より確立され、ヌードマウスに植え継ぎ継代可能となった白血病細胞株、MB-1細胞は、TPA刺激培養上清中にマウス腹腔肥満細胞コロニー形成を支持する活性が認められ、その純化を継続している。肥満細胞はサイトカイン要求性、自己複製能、細胞周期の属性など造血幹細胞に似た特性を有しているため、肥満細胞に作用するサイトカインは造血幹細胞にも働く可能性があると我々は予想している。
TPA刺激MB-1細胞よりcDNAを作製し、約2万個をCOS7細胞に遺伝子導入し、3次スクリーニング(1遺伝子/細胞)まで進めたところ、最終的には明瞭な陽性分画が得られなかった。遺伝子導入の効率化を図り、導入細胞を選択し引き続き検討している。
TPA刺激MB-1細胞培養上清を分画するため硫安沈澱を行った所、硫安80%にてほぼ全ての活性が沈澱部分に回収された。それを10倍濃縮しセファデックスG-100カラムにて分子ふるいにかけ、約100本に分画したところ、活性の殆どは分画55-65に回収された。別に培養上清を塩析クロマトグラフィーを用いて、硫安2.75-0Mで溶出させたところ、約150の分画のうち活性の殆どは分画100-145に回収された。。現在ゲルろ過、疎水クロマトグラフィー、イオン強度を用いた分画法の組合せで更に精製を進めている。
MB-1細胞は造血幹細胞に作用するサイトカイン、IL3、IL6、G-CSF、SCFなどで増殖刺激を受けないため、この細胞に増殖活性を示すサンプルは未知のサイトカインを含む可能性がある。その目的で種々の細胞培養上清をMB-1細胞をターゲットに活性チェックを行ったが、未だ有意な結果は得られていない。更に検討したい。

研究成果

• [文献書誌] Bakic,M.,Asano,S.,et al.: "Sustained c-Kit expression in a human erythroleukemia cell line(HEL)after megakaryocytic differentiation induced by 12-o-tetradecanoylphorbol-13-acetate(TPA)." Leukemia Res.17. 1079-1082 (1993)
• [文献書誌] Shimane,M.,Asano,S.,et al.: "Molecular cloning and characterization of G-CSF induced gene cDNA." Biochem.Biophis.Res.Commun.(in press).
• [文献書誌] Nishikawa,M.,Asano,S.,et al.: "Changes in hematopoiesis-supporting ability of C3H10T1/2 mouse embryo fibroblasts during differentiation." Blood. 81. 1184-1192 (1993)
• [文献書誌] Tani,K.,Asano,S.,et al.: "The production of granulocyte colony-stimulating factor and interleukin 6 by human bone marrow stromal cells in aplastic anemia." Tohoku J.Exp.Med.169. 325-334 (1993)
• [文献書誌] Uemura,N.,Asano,S.,et al.: "Binding of membrane-anchored macrophage colony-stimulating factor(M-CSF)to its receptor mediates specific adhesion between stromal cells and M-CSF-receptor-bearing hematopoietic cells." Blood. 88. 2634-2640 (1993)