生体内におけるキシロシルグルコース型糖鎖の蛍光標識法を用いる検索

1992 年度 実績報告書

• 研究課題/領域番号: 03453164
• 研究機関: 大阪大学
• 研究代表者: 長谷 純宏 大阪大学, 理学部, 教授 (80028232)
• キーワード: キシロシルグルコース / 糖蛋白質 / HPLC / ピリジルアミノ化 / 糖鎖 / 蛍光標識

研究概要

キシロシルグルコース型糖鎖(Xy1α1-3Xy1α1-3G1cβ-0-Ser)はウシ血液凝固VII因子とIX因子等に存在する。この新しいタイプの糖鎖の生理活性を研究するための一歩として、これらの糖鎖がどのような臓器に、又細胞内のどの場所に存在するかを蛍光標識法を用いて明らかにした。前年度尿中より発見したキシロシルグルコースの構造を同定した。また前年度に引き続きキシロシルグルコース型糖鎖の臓器中での存在を調べた。前年度設定した条件下でPA-キシロシルグルコース型糖鎖の検出を行い、マウスとウシの各臓器よりPA-キシロシルグルコース型糖鎖を検出した所、脳、腎臓、血液に多く含まれていた。次に細胞のどの部分に存在するかを、細胞株HepG2の各細胞画分より、PA-少糖を得て調べた。サイズフラクショネーションHPLCと逆相HPLCを組み合わせてPA-キシロシルグルコースの定量を行った所、可溶性画分に最も多く含まれていた。糖鎖構造の明らかな糖蛋白質(例えばタカアミラーゼA)をMultiDrive XLとMultiphorIIを用いてゲル電気泳動を行い、凍結乾燥したゲルをドラジン分解-N-アセチル化、ゲルろ過でPA-糖鎖を調製し、ゲルから抽出したものでもPA-糖鎖が感度よく調製出来る条件を確立した。この条件を用いることにより今後のキシロシルグルコース型糖鎖がどのような糖蛋白質に含まれるかを検出出来る基礎が出来た。

研究成果

• [文献書誌] N.Kuraya: "Release of 〓-Linked Sugar Chains from Glycoproteins with Anhydrous Hydrazine and Pyridylamination of the Sugar Chains with Improved Reaction Conditions" J.Biochem.112. 122-126 (1992)
• [文献書誌] S.Hase: "Conversion of Pyridylamino Sugar Chains to 1-Amino-1-Deoxy Derivatives,Intermediates for Tagging with Fluorescein and Biotin" J.Bichem.112. 266-268 (1992)
• [文献書誌] S.Hase: "Improved Method for the Component Sugar Analysis of Glycoproteins by Pyridylamino Sugars Purified with Immobilized Boronic Acid" Biosci.Biotech Biochem.56. 1676-1677 (1992)
• [文献書誌] K.Fukase: "Synthesis of New Serine-Linked Oligosaccharides in Blood-Clotting Factors VII and IX and Protein Z." Bull.Chem.Soc.Jpn.65. 436-445 (1992)
• [文献書誌] J.Suzuki: "Assay of Urinary Free Fucose by Fluorescence Labeling and High-Performance Liquid Chromatography" Clin.Chem.38. 752-755 (1992)
• [文献書誌] H.Nishimura: "Human Factor IX Has a Tetrasaccgaride 〓-Glycosidically Linked to Serine 61 through the Fucose Residue" J.Biol.Chem.267. 17520-17525 (1992)
• [文献書誌] 長谷 純宏: "複合糖質 ピリジルアミノ化糖鎖とその応用、蛋白質核酸酵素、37" 共立出版, 6 (1992)
• [文献書誌] 長束 俊治: "糖-その多様性を探る(化学増刊122) ピリジルアミノ化法による糖鎖の高感度分析" 化学同人, 8 (1992)