神経成長因子ファミリー蛋白質の培養成熟ラット中枢コリン作動性ニューロンへの作用

1992 年度 実績報告書

• 研究課題/領域番号: 03454160
• 研究機関: 大阪大学
• 研究代表者: 畠中 寛 大阪大学, たんぱく質研究所, 教授 (60208519)
• 研究分担者: 池内 俊彦 大阪大学, 蛋白質研究所, 助手 (20093362)
• キーワード: 神経成長因子 / 神経栄養因子 / 脳由来神経栄養因子 / 細胞生存維持 / 神経分化 / コリン作動性ニューロン

研究概要

本研究では、昨年度、生後2週齢期のラット前脳基底野コリン作動性神経細胞に対するBDNFの生存維持作用について初代培養系を用いて検討した。今年度は、生後8週齢のラットを用い前脳基底野コリン作動性ニューロンをNGF/BDNF存在および非存在下に培養することに成功した。成熟ラット脳からのの培養法は既報に従って行っているが、一部変更し工夫している。細断した組織をパパイン消化の後、細胞の破片を血清密度を変える遠心法で注意深く除き、生細胞を1ウェルに0.5ラット分として48-well plate(培養面積1cm^2のコースター社製または0.65cm^2の住友ベークライト社製、共にあらかじめアストログリア細胞で被膜している)に、まいた。培地は、1μMのcytosine arabinosideを含み、NGF(100ng/ml)存在および非存在下で5日間培養した。培養下のAChE染色による陽性細胞を数えると、NGFの生存維持効果は以前に報告した生後2週齢ラットからの培養前脳基底野コリン作動性ニューロンに対する生存維持作用に比べ低下していた。しかし、その効果は依然認められ、十分な神経繊維の再生を観察した。生後5週齢前後のラットからの培養でも、ほぼ同様の結果を得ている。これらの結果は、以前報告した我々の結果と合わせ考えると、培養下でNGF応答性でみたラット前脳基底野コリン作動性ニューロンの性質は、シナプス形成開始期(E16〜P3)ではChAT活性促進にみられる分化時期を経た後、シナプス形成終了期(P10〜P15)ではニューロンの生存維持が最も強く図られ、その後、NGFによる生存維持効果は低いレベルになるものと思われる。

研究成果

• [文献書誌] Y.Kushima,T.Hama and H.Hatanaka,: "Interleukin-6 as a neurotrophic factor for promoting the survival of cultured catecholaminergic neurons in chemically defined medium from postnatal rat midbrains." Neurosci.Res.,. 13. 267-280 (1992)
• [文献書誌] Y.Enokido,Y.Akanoya,M.Niinobe,K.Mikoshiba and H.Hatanaka,: "Basic fibroblast growth factor rescues CNS neurons from cell death caused by high oxygen atmosphere in culture." Brain Res.,. 599. 261-271 (1992)
• [文献書誌] Y.Kushima and H.Hatanaka,: "Interleukin-6 and leukemia inhibitory factor promote the survival of acetylcholinesterase-positive neurons in culture from embryonic rat spinal cord." Neurosci.Lett.,. 143. 110-114 (1992)
• [文献書誌] T.Nonomura and H.Hatanaka,: "Neurotrophic effect of brain-derived neurotrophic factor on basal forebrain cholinergic neurons in culture from postnatal rats." Neurosci.Res.,. 14. 226-233 (1992)
• [文献書誌] Y.Kushima,C.Nishio,T.Nonomura and H.Hatanaka,: "Effects of nerve growth factor and basic fibroblast growth factor on survival of culcured septal cholinergic neurons from adult rats." Brain Res.,. 598. 264-270 (1992)
• [文献書誌] M.Kojima,N.Takahasi,T.Ikeuchi and H.Hatanaka,: "Nerve growth factor(NGF)-mediated up-regulation of low-affinity NGF receptor gene expression in cultured basal forebrain cholinergic neurons from postnatal 3 day old rats." Mol.Brain Res.,. 16. 267-273 (1992)
• [文献書誌] 畠中 寛: "「神経成長因子ものがたり」" 羊土社、東京, 134 (1992)