| 研究概要 |
恙虫病リケッチアには、Gilliam,Karp,Kato株のようにマウスに対して強毒性を示す株の他に、Shimokoshi,Kawasaki,Kuroki株などのマウスに対して弱毒性の株が存在する。これらの株は血清学的に識別され、その血清型はこのリケッチアの表層に存在する分子量54,000-56,000(56K)蛋白の抗原性によることを我々は明かにした。従ってこの56K蛋白がリケッチアの病原性の強弱を決定する病原因子である可能性がある。そこで昨年度の研究において、我々は上記の血清型を異にする6株のそれぞれから56K蛋白遺伝子をクローニングし、その全塩基配列の解析からこれら蛋白の全アミノ酸配列を明かにした。その結果、これらの株の56K蛋白の構造中には4つの可変領域を含む特徴的な差異が存在することが判明した。
本年度の研究では、この56K遺伝子の5'-末端及び3'-末端領域の各株に共通する領域を選んで約30塩基よりなるプライマーを作成し、それを用いたPCR法により上記6株の56K遺伝子を増幅した。そして得られたDNAを各種制限酵素で切断した時の切断パターンを電気泳動法で比較したところ、株間のこの遺伝子構造の差異を容易に判別することができた。そこで患者及びツツガムシ幼虫より分離した数種のリケッチアの遺伝子構造を同様の方法で比較したところ、この方法により強毒性と弱毒性のリケッチアを容易に判別可能であることが判明した。
一方、56K蛋白遺伝子をプラスミドに挿入して大腸菌に組み入れ、大腸菌によるこの蛋白の発現系の作成に着手した。この研究は現在進行中であるが、ほぼ成功の段階にきている。来年度にはこの大腸菌を用いて、宿主細胞への吸着、侵入にかかわるこの蛋白の分子構造の解明を遺伝子操作法を用いて検索する予定である。
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