1991 年度実績報告書

Tリンパ球抗原レセプタ-に会合するチロシン燐酸化酵素Fynの機能

研究課題

研究課題/領域番号	03454194
研究機関	東京大学
研究代表者	片桐拓也東京大学, 医科学研究所, 助手 (70126100)
研究分担者	鈴木元放射線医学総合研究所, 室長 (00179201) 仙波憲太郎東京大学, 医科学研究所, 助手 (70206663) 大海忍東京大学, 医科学研究所, 助教授 (20160046) 豊田裕東京大学, 医科学研究所, 教授 (90050418)
キーワード	Tリンパ球 / 抗原レセプタ- / Fyn / 活性化 / 細胞内情報伝達 / チロシナ燐酸化 / 遺伝子操作 / 再構成実験系
研究概要	自己免疫マウスMRL/lprで異常に増生して発症要因との関連が示唆されている異型Tリンパ球においては、チロシンキナ-ゼFyn(p59fyn)の過剰発現が認められるが、こうしたTリンパ球ではfyn mRNAの安定性は正常であるが転写活性が亢進しており、高発現維持機構が働いていることが判明した。またこの異常増生Tリンパ球では約3倍量のFynが抗原レセプタ-(TcR)に会合しており、その結果活性化Tリンパ球と同等の蛋白質分子群のチロシン燐酸化が生じている。FynのTリンバ球活性化に果たす役割を知るため、抗原特異的T細胞ハイブリド-マに種々の変異型fyn遺伝子を導入してその抗原応答性の変化を解析した。その結果、正常型fyn或いは活性型fyn遺伝子の高発現クロ-ンでは抗原刺激後のILー2産生量が増大し、一方、SH2欠失型或いは不活性型fynの高発現クロ-ンでは親株と同等の応答性しか示さなかった。次に、TcR複合体を形成してその情報伝達に重要な役割を演じていることが示唆されている分子CD3ζ鎖のチロシン燐酸化とFynとの関連を調べるため、サル腎細胞へFyn及びζ鎖を共発現させる再構成系を用いて検討した。Fynはζ鎖と安定な複合体を形成し、in vivo及びin vitroでζ鎖をチロシン燐酸化できること、また、この燐酸化にSH2領域が重要な役割をしていることが判明した。更に、fyn遺伝子の発現プラスミドと、cーfos遺伝子及びILー2遺伝子プロモ-タにCAT遺伝子を接続したレポ-タ-プラスミドをT細胞株jurkatに同時移入して、これらの遺伝子の転写活性に及ぼすFynの効果をCATアッセイで解析した。その結果、Fynがcーfos遺伝子及びILー2遺伝子の発現誘導において重要な役割を果たしていることが示唆された。以上の本年度の実験結果から、FynがTリンパ球の抗原応答時の細胞内情報伝達に深く関わっていることが示された。

研究成果

(8件)

すべてその他

すべて文献書誌 (8件)

[文献書誌] Katagiri,T.et al.: "Tetraparental mice reveal complex cellular interactions of the mutant,autoimmunityーinducing lpr gene." J.Immunol.(1992)
[文献書誌] Koyasu,S.et al.: "Phosphorylation of multiple CD3ζ tyiosine residues lends to formation of pp21 in vitro and in vivo:structu changes upon T cell receptor stimulation." J.Biol.Chem.(1992)
[文献書誌] Katagiri,T.et al.: "Enhanced association of p59^<fyn> tyrosine kinase with T cell antigen recptor in CD4^-CD8^-T cells of lpr/lpr mice" J.Immunol.
[文献書誌] Takahashi,T.et al.: "Inductive and constitutive expression of fyn gene for proteinーtyrosine kinase in normal and lpr/lpr T cells." J.Immunol.
[文献書誌] Fusaki,N.et al.: "Enhancement of Tーcell responsiveness by the Tーcell receptor associated tyrosine protein kinase P59^<fyn>"
[文献書誌] Takeuchi,K.et al.: "The role of proteinーtyrosine kinase p59^<fyn> in activation of T lymphocytes."
[文献書誌] Katagiri,T.,Kurokawa,A.Urakawa,K.,Sakamoto,A.,Earp,H.S.and Yamamoto: "Action of murine autommuneーaccelerating genes,lprand Yaa: enhanced activity of src family tyrosine kinases in abnormal T and B cells,In “Molecular Approaches to the Study and Treatment of Human Diseases."" Elsevier Science Publishers B.V.Amsterdam, (1992)
[文献書誌] 片桐拓也: "抗原レセプタ-を介するシグナル伝達とsrcファミリ-キナ-ゼ免疫'91 代謝増刊号" 中山書店, 205 (1991)

1991 年度 実績報告書

Tリンパ球抗原レセプタ-に会合するチロシン燐酸化酵素Fynの機能

研究代表者

片桐 拓也 東京大学, 医科学研究所, 助手 (70126100)

研究成果

[文献書誌] Katagiri,T.et al.: "Tetraparental mice reveal complex cellular interactions of the mutant,autoimmunityーinducing lpr gene." J.Immunol.(1992)

[文献書誌] Koyasu,S.et al.: "Phosphorylation of multiple CD3ζ tyiosine residues lends to formation of pp21 in vitro and in vivo:structu changes upon T cell receptor stimulation." J.Biol.Chem.(1992)

[文献書誌] Katagiri,T.et al.: "Enhanced association of p59^<fyn> tyrosine kinase with T cell antigen recptor in CD4^-CD8^-T cells of lpr/lpr mice" J.Immunol.

[文献書誌] Takahashi,T.et al.: "Inductive and constitutive expression of fyn gene for proteinーtyrosine kinase in normal and lpr/lpr T cells." J.Immunol.

[文献書誌] Fusaki,N.et al.: "Enhancement of Tーcell responsiveness by the Tーcell receptor associated tyrosine protein kinase P59^<fyn>"

[文献書誌] Takeuchi,K.et al.: "The role of proteinーtyrosine kinase p59^<fyn> in activation of T lymphocytes."

[文献書誌] 片桐 拓也: "抗原レセプタ-を介するシグナル伝達とsrcファミリ-キナ-ゼ免疫'91 代謝増刊号" 中山書店, 205 (1991)

1991 年度実績報告書

片桐拓也東京大学, 医科学研究所, 助手 (70126100)

[文献書誌] 片桐拓也: "抗原レセプタ-を介するシグナル伝達とsrcファミリ-キナ-ゼ免疫'91 代謝増刊号" 中山書店, 205 (1991)