ヒト特異的DNA領域の検出とその個体識別法への応用

1992 年度 実績報告書

• 研究課題/領域番号: 03454213
• 研究機関: 筑波大学
• 研究代表者: 三澤 章吾 筑波大学, 社会医学系, 教授 (50086534)
• 研究分担者: 植田 信太郎 東京大学, 理学部, 助教授 (20143357) ; 鷲尾 慶子 筑波大学, 社会医学系, 助手 (60230942) ; 田中 栄之介 筑波大学, 社会医学系, 講師 (30138416) ; 原田 勝二 筑波大学, 社会医学系, 助教授 (60086618)
• キーワード: DNA多型 / PCR法 / ヒト特異性 / 人獣鑑別 / 個人識別 / ゲノム・サブトラクション / チンパンジー・ゲノムDNA / ヒト特異的DNA領域

研究概要

本研究では、ヒト特異的な遺伝子領域を得るための手段として、ヒトのゲノムDNAからヒトに最も近縁な種として考えられるチンパンジーのゲノムDNAを差し引くゲノム・サブトラクションという手法を採用した。このようにして得られたクローンをプローブに用いたゲノムDNAとのサザンハイブリダイゼーションにより、ヒト特異的DNA断片と考えられる1クローン(PER 5)を検出した。PER 5を含むヒトとチンパンジーのDNA領域の全塩基配列を調べ、ヒトのみに存在し、チンパンジーには存在しない2282塩基対のヒト特異的DNA領域(HS5)を得ることができた(1991年における成果)
このHS5をプローブとしてヒト totalDNAとの間でサザンハイブリダイゼーションを行ったところ、三大人種の個体例に例外なく単一のバンドが得られた。性差、人種差、個体差もなく、この領域はヒトゲノム中にのみ存在していることが明らかになった。
HS5をプローブとして、人獣鑑別の目的でヒトとヒト以外の霊長類6種(チンパンジー、オランウータン、テナガザル、カニクイザル、キツネザル)のDNAを用いたZoo-blottingを行ったところ、ヒト以外にバンドの出現は認められなかった。ヒト以外のイヌ、ウサギ、マウス、ニワトリのいずれの種においてもシグナルは検出されなかった。ヒト血液についてHS5を用いてドットブロットハイブリダイゼーションを行ったところ、ヒト新鮮血痕、1週間経過血痕、1ヶ月経過血痕ではDNA0.1μg(血液0.02〜0.03ml相当)、6ヶ月経過血痕ではDNA0.1μg(血液0.2〜0.33ml相当)でシグナルの検出が可能であった。
現在HS5以外のヒト特異的領域の検出と、ALU familyのBLUR 2のヒト特異性を検討している。

研究成果

• [文献書誌] 三澤章吾: "血液にみられる遺伝的多型の法医人類学への応用" 日本法医学雑誌. 45. 263-276 (1991)
• [文献書誌] Tanaka,E: "Characterization of Liver Microsomal Cytochrome P450 From Rats Treated with Muscone" Biochem.Pharmacol.41. 472-473 (1991)
• [文献書誌] Kurosaki,K.: "Dinucleotide Repeat Polymorphism at Appolipo-protein AII Locus:Phenotyping from peripherd Blood and Hair." Jpn J Legal Med. 46. 1-6 (1992)
• [文献書誌] Washio,K.: "Human Evolution and Human-Specific DNA sequences" TOPICS IN PRIMATOLOGY. 359-367 (1992)
• [文献書誌] Harada,S.: "Detection of GST1 gene deletion by the poly-merase chain reaction and its possible correlation with stomach cancer in Japanese" Hum Genet.90. 62-64 (1992)
• [文献書誌] 下郷一夫: "DNA鑑定ーその意義と限界" ジュリスト. 1010. 83-96 (1992)
• [文献書誌] 原田勝二編: "ヒトDNA Polymorphismー検出技術と応用" 東洋書店, 299 (1991)
• [文献書誌] Washio,K.: "Paternity in Primates:Genetic tests and theories Implications of Human DNA Fingerprinting" Karger, 287 (1992)