ケラチノサイトの合成する190^<kd>コラ-ゲンポリペプチド遺伝子のクロ-ニング

1991 年度 実績報告書

• 研究課題/領域番号: 03454274
• 研究機関: 慶応義塾大学
• 研究代表者: 多島 新吾 慶應義塾大学, 医学部, 講師 (60129525)
• 研究分担者: 石河 亜紀子 慶應義塾大学, 医学部, 助手 (00193954) ; 山田 晴義 慶應義塾大学, 医学部, 助手 (70200730)
• キーワード: ケラチノサイト / コラ-ゲン / 遺伝子

研究概要

培養マウスケラチノサイト約2×10^7個より塩酸グアニジウム法を用いて全RNAを約400μg抽出した。さらにこれをオリゴdTカラムを用いてpolyARNAを約62μgを単離した。このRNA1μgをテンプレイトとしてコラ-ゲン遺伝子n共通な配列、5'CCNGGNGGNCCNGG3'14merの合成オリゴヌクレオチドをプライマ-に用いてdouble strand cDNAを合成した。λgt10をベクタ-に用いてcDNAライブラリ-を作製し2×10^3個のクロ-ンを得た。各クロ-ンをSau96I消化し、コラ-ゲン遺伝子に特有な9bpのラダ-パタ-ンを示すクロ-ンを探した。その結果300クロ-ンのうち1個のクロ-ン(pKC7)がこのパタ-ンを示した。insertは約3.5kbでPstI,HindIII,KpnIの各siteを有し、SmaI,HincII、Xba、EcoRIの各siteは有していないことがわかった。Northern blotの結果、このcDNAは約6.0kbのmRNAのサイズを有することがわかった。現在このクロ-ンの塩基配列を決定中である。