| 研究課題/領域番号 |
03454435
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| 研究機関 | 岩手医科大学 |
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研究代表者 |
太田 稔 岩手医科大学, 歯学部・口腔生化学講座, 教授 (70048255)
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| 研究分担者 |
根本 優子 岩手医科大学, 歯学部・歯科放射線学講座, 助手 (10164667)
永井 雅純 岩手医科大学, 歯学部・口腔生化学講座, 助手 (00217960)
客本 斉子 岩手医科大学, 歯学部・口腔生化学講座, 助手 (90118274)
根本 孝幸 岩手医科大学, 歯学部・口腔生化学講座, 講師 (90164665)
佐藤 詔子 岩手医科大学, 歯学部・口腔生化学講座, 助教授 (00048399)
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| キーワード | ヒト顎下腺 / ヒト顎下腺細胞株 / 上皮成長因子 / EGF / 上皮成長因子レセプタ- |
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| 研究概要 |
私共はグルココルチコイドがヒト顎下腺由来腺癌細胞株(human salivary gland adenocarcinoma cell,HSG)の増殖を抑制することや、この抑制作用がこの細胞自らが分泌する上皮増殖因子(EGF)様分子の産生抑制に起因することから、この細胞がオ-トクリン的な増殖を行うことを知った。本研究ではHSG細胞におけるEGF様分子による細胞の増殖の遺伝子発現調節についてEGF様分子ーレセプタ-(EGFーR)の面から検索した。
(1)はじめにEGF様分子の精製を行った。我々が確立した無血清培養法で培養したHSG細胞の培養液を大量に得、これを抗ヒトEGF抗体結合セファロ-ス4Bカラムに添加、洗浄後、酢酸で溶出した。得た画分を透析濃縮、精製EGF様分子標本とした。これをHSG細胞培養系に加えたところ、[ ^3H]チミジンの細胞への取込みを濃度依存的に約1.5倍増加させ、精製EGF様分子の増殖促進活性が確認された。次に、この分子のEGFーRへの結合能を[ ^<125>I]EGFのEGFーRへの結合に対する競合実験により検討した。この結合EGF様分子は[ ^<125>I]EGFのEGFーRへの結合を濃度依存的に競合阻害し、EGFーRと結合能を持つことが示された。
(2)EGF様分子ーRがEGF様分子と結合することによりレセプタ-のチロシンキナ-ゼが活性化され、リン酸化が惹起され、これに伴ってレセプタ-がモノマ-からダイマ-への二量体化を伴うか否かを調べるためにHSG細胞[ ^<35>S]メチオニンでラベルした後、一方はそのまま、他方はEGFあるいはEGF様分子で10分間処理後、膜画分を調製した。これをリン酸化チロシン抗体と結合させ、proteinAで分離後,SDSーPAGEを行い、フルオログラフィ-により、リン酸化されたバンドを同定した。この結合EGFあるいはEGF様分子処理群において分子量約340KDのバンドが新たに出現した。この分子がEGFーRの二量体である可能性は高く、現在特異抗体を用いたイムノブロット法により検索中である。
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