1991 年度実績報告書

エイズウイルスの抗コアタンパク質単クロ-ン抗体の調製及び診断への応用

研究課題

研究課題/領域番号	03454494
研究機関	熊本大学
研究代表者	久保田幸穂熊本大学, 薬学部, 教授 (30040299)
研究分担者	古石和親熊本大学, 薬学部, 助手 (40238663) 船越崇行熊本大学, 薬学部, 助教授 (90150549) 庄司省三熊本大学, 薬学部, 助教授 (60040317)
キーワード	エイズ / HIVー1 / レトロウイルス / ミリストイル化 / Nーミリストイルグリシン / 抗Nーミリストイルグリシン抗体
研究概要	1.エイズウイルスコアタンパク質(p17^<gg>)のアミノ末端ミリストイルグリシンに対する特異抗体の調製ここでは便宜上エイズの原因ウイルス(HIVー1)をエイズウイルスと呼ぶ。ミリストイルグリシン(NーMyrーGly)を水溶性活性エステル化剤を用い、キ-ホ-ルリンペットヘモシアニン(KLH)及びウシ血清アルブミン(BSA)に結合させ、NーMyrーGlyーKLHを免疫抗原及びNーMyrーGlyーBSAをassay抗原として用いた。まず免疫抗原(10μg/0.1ml)をウサギに一週間毎に4回皮下注射し、1ヵ月後同抗原を静注し、4〜5日目に採血した。血清中のNーMyrーGly分子に対する抗体価をNーMyrーGlyーBSAを抗原として、ELISA法により求めた。 2.抗NーMyrーGly抗体の部分精製と抗体の特異性ウサギを常法により免役して得られたNーMyrーGlyに対する抗血清をNーMyrーGlyーBSA分子をアガロ-スゲルに固定化した抗原カラムを用いて部分精製した。抗体カラムに抗原抗体反応により吸着する抗体の量は血清1ml当り約1mgであった。この抗体の特異性を調べるため、脂肪酸分子の2メチレン鎖短いNーラウロイルーグリシン(NーLauーGly)ーBSA、2メチレン鎖長いNーパルミトイルーグリシン(NーPalーGly)ーBSA及び種々のグリシンペプチドを合成した。本抗体はNーMyrーGlyーBSA、NーLauーGlyーBSA、及びNーPalーGlyーBSAに反応し、BSA及び他のグリシンペプチドとは反応しなかった。この事から本抗体はNーfatty acylーGlyー分子を認識している事が明らかになった。 3.抗NーMyrーGly抗体によるエイズウイルスコアタンパク質の検出上記のように調製した抗体とエイズウイルスコアタンパク質NーMyrーGly p17^<gg>タンパク質との反応をウエスタンイムノブロット法及び ^<125>Iー放射免疫沈降法を用いて調べた。その結果、本抗体はp17^<gg>タンパク質と反応することが明らかになったが、p17^<gg>タンパク質以外にも数種のタンパク質と反応することが判明した。現在、更に本抗体の特異性を向上させるためNーMyrーGly分子に対する単クロ-ン抗体を調製中であり、次年度本単クロ-ン抗体の調製に全力を注ぐ予定である。

研究成果
(6件)

すべてその他

すべて文献書誌 (6件)

[文献書誌] 庄司省三: "A novel antibody against a synthetic NH_2ーterminal myristoyl glycyl src peptide can detect pp60^<vーsrc>,the transforming protein of Rous sarcoma virus." Mol.Cell.Probes. 3. 213-224 (1989)
[文献書誌] 庄司省三: "Antibodies to an NH_2ーterminal myristoyl glycine moiety can detect NH_2ーterminal myristoylated proteins in the retrovirusーinfected cells." Biochem.Biophys.Res.Commun.162. 724-732 (1989)
[文献書誌] 庄司省三: "Antimyristoylation of gag proteins in human Tーcell lymphotropic and human immunodeficiency viruses by Nーmyristoylglycinal diethylacetal." Annals of the New York Academy of Sciences.616. 97-115 (1990)
[文献書誌] 庄司省三: "Myristoylated srcーoncogene products are potently detected by the monoclonal antibody to the NH_2ーterminal myristoylーGlyーSerーSerーLys srcーpeptide." Biochem.Biophys.Res.Commun.170. 657-664 (1990)
[文献書誌] 庄司省三: "Human cellular srcーgene product: Identification of the myristoylated pp60^<vーsrc>,and blockage of its myristoyl acylation with Nーfatty acylation with Nーfatty compounds resulted in the suppression of colony formation." Biochem.Biophys.Res.Commun.173. 894-901 (1990)
[文献書誌] 庄司省三: "NーFatty acyl compounds inhibit myristoyl acylation of pp60^<vーsrc> and reduce tumorigenesity of Rous asrcoma virusーinfected cells." Biochemistry Inter.23. 15-23 (1991)

1991 年度 実績報告書

エイズウイルスの抗コアタンパク質単クロ-ン抗体の調製及び診断への応用

研究代表者

久保田 幸穂 熊本大学, 薬学部, 教授 (30040299)

研究成果

[文献書誌] 庄司 省三: "A novel antibody against a synthetic NH_2ーterminal myristoyl glycyl src peptide can detect pp60^<vーsrc>,the transforming protein of Rous sarcoma virus." Mol.Cell.Probes. 3. 213-224 (1989)

[文献書誌] 庄司 省三: "Antibodies to an NH_2ーterminal myristoyl glycine moiety can detect NH_2ーterminal myristoylated proteins in the retrovirusーinfected cells." Biochem.Biophys.Res.Commun.162. 724-732 (1989)

[文献書誌] 庄司 省三: "Antimyristoylation of gag proteins in human Tーcell lymphotropic and human immunodeficiency viruses by Nーmyristoylglycinal diethylacetal." Annals of the New York Academy of Sciences.616. 97-115 (1990)

[文献書誌] 庄司 省三: "Myristoylated srcーoncogene products are potently detected by the monoclonal antibody to the NH_2ーterminal myristoylーGlyーSerーSerーLys srcーpeptide." Biochem.Biophys.Res.Commun.170. 657-664 (1990)

[文献書誌] 庄司 省三: "NーFatty acyl compounds inhibit myristoyl acylation of pp60^<vーsrc> and reduce tumorigenesity of Rous asrcoma virusーinfected cells." Biochemistry Inter.23. 15-23 (1991)

1991 年度実績報告書

久保田幸穂熊本大学, 薬学部, 教授 (30040299)

[文献書誌] 庄司省三: "A novel antibody against a synthetic NH_2ーterminal myristoyl glycyl src peptide can detect pp60^<vーsrc>,the transforming protein of Rous sarcoma virus." Mol.Cell.Probes. 3. 213-224 (1989)

[文献書誌] 庄司省三: "Antibodies to an NH_2ーterminal myristoyl glycine moiety can detect NH_2ーterminal myristoylated proteins in the retrovirusーinfected cells." Biochem.Biophys.Res.Commun.162. 724-732 (1989)

[文献書誌] 庄司省三: "Antimyristoylation of gag proteins in human Tーcell lymphotropic and human immunodeficiency viruses by Nーmyristoylglycinal diethylacetal." Annals of the New York Academy of Sciences.616. 97-115 (1990)

[文献書誌] 庄司省三: "Myristoylated srcーoncogene products are potently detected by the monoclonal antibody to the NH_2ーterminal myristoylーGlyーSerーSerーLys srcーpeptide." Biochem.Biophys.Res.Commun.170. 657-664 (1990)

[文献書誌] 庄司省三: "NーFatty acyl compounds inhibit myristoyl acylation of pp60^<vーsrc> and reduce tumorigenesity of Rous asrcoma virusーinfected cells." Biochemistry Inter.23. 15-23 (1991)