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(1)細胞外液カルシウム(Ca)による遺伝子発現抑制機構にかかわる核内転写因子(nCaREB)の構造を目的に、SDSポリアクリルアミド電気泳動(PAGE)と標識オリゴヌクレオチド(nCaRE)を用いて、培養細胞核蛋白のサウスウエスタン解析を行った。その結果高濃度ジスレイオール(DDT)存在下で、塩基配列特異的にnCAREと結合する約35KDaの蛋白を見いだした。この蛋白のDNA活性は細胞外液Ca濃度の上昇に伴い増強した。nCaREBのクローニングの過程で得た3つのクローンの内、分子量37KDaの蛋白reflについて解析した。その結果reflがnCaREBと特異的に結合すること、ほ乳培養細胞にトランスフェクションしたreflはゲルシフトアッセイでnCaREB活性を増強すること、in vitro translationによって発現させたreflにはDNA結合活性が殆ど無いことを見いだした。このことは細菌や培養細胞において保存されている何らかの蛋白修飾因子がreflのDNA結合に必要であることを示す。さらにレポーター遺伝子の実験で、reflがnCaREBそのものか、少なくともnCaREBの活性を増強する核蛋白であることを強く示唆する。(2)カルシトニン分泌細胞のカルシウムレセプターのクローニング実験は、昨年度に引き続きゼノパス卵でのエクスプレッションクローニングを行った。cDANライブラリーから当該のものを得るべく、実験を遂行しているが10個ほどまで絞りこんでいる。
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