| 研究課題/領域番号 |
03454517
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| 研究種目 |
一般研究(B)
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| 配分区分 | 補助金 |
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| 研究分野 |
内分泌・代謝学
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| 研究機関 | 山口大学 |
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研究代表者 |
加来 浩平 山口大学, 医学部, 助教授 (10116709)
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| 研究分担者 |
松谷 朗 山口大学, 医学部・附属病院, 助手 (10190464)
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| 研究期間 (年度) |
1991 – 1993
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| キーワード | NIDDM / グルコキナーゼ遺伝子 / PCR-SSCP / 直接シーケンス / シーケンス変異 / プロモーター活性 / sequence variation / promoter activity |
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| 研究概要 |
(1)ヒトグルコキナーゼ(GCK)遺伝子シーケンス変異の解析
これまでの実験成績からGCK遺伝子異常が日本人インスリン非依存型糖尿病(NIDDM)の発症に密接に関わる可能性が示唆されたため、本遺伝子の12個のエクソンならびにプロモーター領域において変異の有無をPCR-SSCP法および直接シーケンス法にて解析した。まずNIDDMに特徴的なalleleである“Z+4"あるいは“-2"をもつNIDDM患者36例について変異をみた結果、エクソン4においてCCC(Pro)-CCG(Pro)の変異を3名に認めた。また膵型プロモーター領域の-282でC-T、-194でA-G、-30でG-Aの変異を、肝型プロモーター領域の-258でG-Aの変異を、非翻訳領域の+403でC-Gの変異を認めた。しかしこれらのプロモーター部位での変異の出現頻度を糖尿病群、非糖尿病群で比較した結果、有意な差異がえられなかった。
(2)ヒトGCK遺伝子のプロモーター解析
プロモーター領域における遺伝子変異が本遺伝子発現にいかなる影響を及ぼすかを明らかにするためプロモーター活性を測定した、活性測定は膵型プロモーター(IP)を組み込んだルシフェラーゼ発現ベクターをHIT細胞に発現させ、ルシフェリン-ルシフェラーゼアッセイにより行った。IP-2(-176^〜+80)によりルシフェラーゼ発現をみとめ、この活性は膵B細胞に特異的であること、IP-1(-390^〜-130)を追加することで発現は増強されたこと、ゲルシフトアッセイでIP-2に結合するB細胞に特異的な核蛋白が存在し、遺伝子発現に関与することが示唆された。次にプロモーター変異体のプロモーター活性をみたところIP-2変異体(-30がG-A)ではプロモーター活性は有意に低かった。
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