| 研究課題/領域番号 |
03454539
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| 研究機関 | 大阪大学 |
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研究代表者 |
福井 俊郎 大阪大学, 産業科学研究所, 教授 (90029843)
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| 研究分担者 |
多賀谷 光男 大阪大学, 産業科学研究所, 助手 (30179569)
谷澤 克行 大阪大学, 産業科学研究所, 助教授 (20133134)
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| キーワード | ジャガイモ酵素 / UDPGピロホスホリラ-ゼ / アデニレ-トキナ-ゼ / ヌクレオチド結合部位 / 酵素の活性部位 / リジン / ロイシン |
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| 研究概要 |
私どもは、これまでにヌクレオチド(または糖ヌクレオチド)の結合部位にあるリジン残基を特異的に標識する新しい型の試薬を開発すると共に、いわゆるグリシン・リッチ領域への変異導入を試みてきた。本研究課題のもとで平成3年度では、以下のような新しい知見を得た。
1.ニワトリ骨格筋アデニレ-トキナ-ゼにおいてL66を種々のアミノ酸に置換した変異酵素を作成し、それらの酵素学的ならびに物活化学的性質を調べることにより、この残基がAMPのアデニン環を認識する役割をもつことを明らかにした。また、この残基の疎水性が基質結合の正の協同性に対して重要であることもわかった。
2.ウリジンジ(トリ)リン酸ピリドキサ-ルによりジャガイモ塊茎UDPGピロホスホリラ-ゼを親和標識することにより、5このリジン残基がUDPG結合領域に存在することが明らかになり、さらに、この修飾は5このリジン残基に対して相互に排他的におこることがわかった。2種の試薬により、結果はあまり変らなかった。
3.ジャガイモ塊茎UDPGピロホスホリラ-ゼcDNAの大腸菌体内発現系を利用して、上記の5このリジン残基を1こづつグルタミンに置換した変異酵素を作成した。それぞれの変異酵素の酵素学的性質から、K367がこの酵素の活性発現に必須であることを明らかにした。
4.3種のUDPG関連反応性アナログによる比較親和標識の結果から、ジャガイモ塊茎UDPGピロホスホリラ-ゼの糖ヌクレオチド結合領域における5このリジン残基の配置を推定することができた。この配置は、先の変異酵素の酵素学的性質をうまく説明することができる。
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