| 研究課題/領域番号 |
03454541
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| 研究機関 | (財)東京都臨床医学総合研究所 |
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研究代表者 |
矢原 一郎 東京都臨床医学総合研究所, 細胞生物, 研究員 (60109957)
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| 研究分担者 |
宮田 愛彦 東京都臨床医学総合研究所, 細胞生物, 研究員 (70209914)
飯田 和子 東京都臨床医学総合研究所, 細胞生物, 研究員 (40151229)
松本 清治 東京都臨床医学総合研究所, 細胞生物, 研究員 (40190532)
南 康文 東京都臨床医学総合研究所, 細胞生物, 研究員 (40181953)
小安 重夫 東京都臨床医学総合研究所, 細胞生物, 研究員 (90153684)
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| キーワード | ストレスタンパク質 / HSP90 / アクチン結合タンパク質 / グルココルチコイド受容体 / カゼインキナ-ゼII / 複合体形成 |
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| 研究概要 |
1)マウスリンホ-マ細胞より精製したHSP90を未変性ゲル電気泳動したところ、その主成分はダイマ-(2本)とモノマ-(1本)に分かれた。それぞれのバンドを切り出し、6%ポリアクリルアミド電気泳動、ペプチドマッピング、N端のアミノ酸配列決定によってそれらのアイソタイプ組成を決定した。その結果、2本のダイマ-はα/αおよびβ/βのホモダイマ-であり、1本のモノマ-はβアイソタイプのみであった。
2)HSP90はアクチン結合タンパク質である。細胞質8Sグルココルチコイド受容体はホルモン結合タンパク質とHSP90ダイマ-の複合体である。細胞粗抽出液中の8S受容体を放射性標識グルココルチコイドでラベルし、重合アクチンとの結合を検討した。その結果、8S受容体は重合アクチンと共沈澱し、共沈はフリ-のHSP90、トロポミオシンあるいはCa^<2+>ーカルモデユリンによって阻害された。この結果は8S受容体がそのHSP90構成要素を介して重合アクチンに結合することを示している。
3)HSP90の精製標品にプロテインキナ-ゼ酵素活性が混在することを見出し、それがカゼインキナ-ゼIIであると同定した。抗体によるショ糖密度勾配遠心ピ-クのシフトおよび免疫共沈澱によって、細胞粗抽出液中のカゼインキナ-ゼIIがHSP90と複合体を作っていることを示した。さらに、精製したカゼインキナ-ゼば低イオン強度でフィラメント状の沈澱となるが、その時HSP90を添加すると8Sの両者の複合体となり可溶化した。また、カゼインキナ-ゼIIの活性をHSP90によって上昇することを見出した。
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